人大内皮素检测试剂盒即酶联免疫吸附试验的通用步骤

捕获抗体、标准品和检测抗体均为冻干粉，使用前应保存于-20℃,捕获抗体、标准品和检测抗体重悬后，在4℃时最长保存2周。如果您已重悬了EDK的各组份，并准备在2周之后使用，请将重悬的组分分装并冻存于-20℃，最长可保存6个月。

人大内皮素ELISA试剂盒, 英文名称：NPC endothelin (Big ET) ELISA kit

货    期：现货,主要用途：科研检测,用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。

与EDK的其它三个组分不同，Avidin-HRP为即用型

目的是避免反复冻融或长期4℃保存对该组分的功能损害。收到Avidin-HRP后，立即将其分装为6ul/管，共10管，冻存于-20℃，最长可保存2年

人大内皮素检测试剂盒第1阶段：

捕获抗体包板,将捕获抗体稍作离心，使抗体集中于管底,用无菌水将捕获抗体重悬至说明书上要求的浓度，静置10分钟以使抗体完全溶解,重悬的抗体以最高速度离心3分钟,用1xPBS稀释捕获抗体至说明书上要求的浓度,轻轻颠倒或振荡混匀，一定不要产生气泡。

立即在每个ELISA板孔中加入100uL捕获抗体,将封板膜用力压盖在ELISA板上，注意不要使抗体滴溅在封板膜上,25 ℃孵育过夜，或者37℃孵育2-4个小时,洗板时需将液体倒掉，并在干净的吸水纸上拍干,每孔加入300ul 洗液，然后再将液体吸除,该步骤再重复3次，总共洗涤4次,最后一次洗涤后，将板倒置以去除液体，并在干净的吸水纸上拍干,ELISA板还有其它几种洗涤方法。无论使用哪种方法，请在整个ELISA实验过程中保持一致。

人大内皮素检测试剂盒第二阶段：封闭非特异性结合

牛血清白蛋白作为封闭试剂，可封闭塑料孔内任何未结合蛋白的位点,每孔中加入300ul封闭液,封板，并在25 ℃孵育至少1小时。

第3阶段：抗原的特异性结合,在上一孵育过程结束前,将标准品稍作离心,并用无菌水重悬至要求的浓度,静置至少10分钟，以使标准品完全溶解,重悬结束后，取出板并洗涤4次,重悬的标准品以最高速度离心3分钟,稀释到所需浓度，轻轻颠倒或振荡混匀,标准曲线在ELISA板上的区域专用于检测已知浓度的蛋白标准品,如果使用多道移液器，除第一列外的所有标准曲线孔中均加入100ul稀释液,然后，人大内皮素检测试剂盒在标准曲线孔的第一列中加入200ul标准品溶液,依次倍比稀释，标准品至少有6个浓度,每个标准曲线孔中液体的终体积应为100ul,标准品至少有6个浓度，每个浓度为3个复孔，再设6个空白孔，其中仅含稀释液,空白孔是必须的，它们将用来评价试剂盒检测样本的效能,然后，在剩余孔中加入待测样本，每个样本设3个复孔,样本中若待检抗原的浓度过高，要得到最佳结果可能需对样本进行稀释,封板，25 ℃孵育2小时。

人大内皮素检测试剂盒第4阶段：加入生物素标记的检测抗体以形成夹心,孵育结束前，稍离心检测抗体，并用无菌水重悬，静置10分钟,孵育结束后，取出板，洗涤4次,最高速度离心3分钟。