9，10-二甲基-1，2苯并蒽荧光定量PCR技术，即是在PCR反应体系中加入荧光物质，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，对未知模板进行定量分析的方法。具有应用范围广，灵敏度高，操作简便、特异性和可靠性更强、自动化程度高、无污染、具实时性和准确性等特点。              

RNA提取（Trizol法）

Trizol试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，9，10-二甲基-1，2苯并蒽剂并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层（无色）主要为RNA，有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质。

9，10-二甲基-1，2苯并蒽实验步骤：

1.  RNA的提取；

2.  反转录合成cDNA；

3.  PCR扩增；

4.  产物的电泳和结果的测定。

 9，10-二甲基-1，2苯并蒽送样要求：

1、组织样本：-20℃或-80℃低温冰箱中保存，液氮或者干冰运输;市内或短途运输可冰袋运输。若提供的材料为新鲜组织、血液细胞等生物材料，请提供足够提取2ug以上基因DNA的材料量。

2、DNA样本：体积≥50ul，浓度≥50ng/ul，DNA总量≥2ug，纯度 OD260/280 在1.7～1.9之间，不含PCR抑制剂，须注明准确浓度。样品须低温冰袋运输。

3、血液样本：要求保存于抗凝管中或冻存管中，体积大于2ml，请用干冰运送，保证DNA不降解。

4、样品为石蜡包埋组织切片的，9，10-二甲基-1，2苯并蒽要求提供10张组织切片光片(面积>10mm×10mm,厚度约5-10um)。