A204【人横纹肌肉瘤细胞】代数低，状态好，发货快，细胞库管理规范，种类齐全，价格优惠，在做传代细胞培养之前，首先将培养瓶置于显微镜下，观察培养瓶中细胞是否已长成致密单层，如已长成单层，即可进行细胞的传代培养。

A204【人横纹肌肉瘤细胞】描述

细胞生长：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

细胞数量：1×10⁶个

细胞传代：1:3传代,2-3天传一代

细胞纯度：92.2％

细胞活力：88.4％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

细胞冻存：液氮冻存（完全培养基+10%DMSO+20%FBS）

细胞运输：干冰运输（1 Vial）或活细胞运输（T-25 flasks）

细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗

A204【人横纹肌肉瘤细胞】培养条件

McCoy’s 5a,90%；优质胎牛血清，10%

气相：空气，95%；二氧化碳，5%

温度：37摄氏度

A204【人横纹肌肉瘤细胞】传代方法

显微镜下观察细胞，当覆盖80%底面积时，进行细胞传代。注意不要等到细胞覆盖100%的时候才传代，那样细胞容易老化。在生物安全柜或者超净台中，将培养瓶中的培养基倒到废液缸中用PBS或者生理盐水洗一遍加入1.5ml 0.25%含有EDTA的胰酶，在37℃培养箱中消化3-5分钟后取出细胞，加入5ml培养基，吹打均匀后，转移到15ml离心管中，1000rpm 离心5分钟离心后，去掉上清，用新鲜培养基重悬细胞，按照1:3的比例进行细胞传代培养。

A204【人横纹肌肉瘤细胞】传代密度均匀，有以下几点比较重要：

1.尽量消化细胞分散成单细胞悬液。对于易于消化的细胞，我一般DPBS清洗一遍，加0.5ml胰酶润洗一遍（25cm2培养瓶或6孔板），弃掉胰酶，37度消化2-3分钟或室温消化5min左右，镜下观察是否细胞消化较为分散。如果不够，延长消化时间。我见过有些刚进实验室的师弟师妹，一上来就加1-2ml胰酶，结果细胞团大片脱落，虽然有后续吹打步骤，但我觉得效果不佳。至于难消化的细胞，怎么掌握分寸，还待自己摸索或其他战友分享。

2.在以上基础上，我觉得细胞吹匀，这步比上述提到的十字移动等更为重要。如传代1:4 ,可以收集所有细胞至离心管，加入培养液重悬混匀，吸管缓慢吹打20-30次，可配合水平摇晃离心管。

3.此外我觉得培养液的量可能也会有讲究，如6孔板中你最终加入2ml细胞悬液，尤其像这样的小面积培养皿，液体表面有张力，细胞易于聚集在中间，所以我一般6孔板再加1ml以消除影响，吸管缓慢吹打15-20次左右继续混匀。

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