-
- 地区
- 全部
-
- 会员级别
- 全部
OK;负鼠肾细胞详细说明
细胞名称 OK;负鼠肾细胞
生长特性 贴壁生长
形态特性 上皮样
产品规格 1×10^6 cells/瓶
培养条件 MEM+10%FBS+1%P/S
生长条件 气相:5%CO2 95% 空气 温度:37 ℃
冻存条件 90%FBS+10%DMSO
背景资料 此细胞株最初是为研究X染色体失活时提供X染色体,随后发现它是极好的肾近曲小管上皮细胞的细胞培养模型。此细胞在培养时表达多种受体,并被广泛地用作研究这些受体的模型。
OK;负鼠肾细胞常规说明:
冻存液成分:10%DMSO+40%FBS+50%基础培养液
细胞质检情况:不含细菌、真菌、支原体等微生物污染
传代建议:1:2~1:3传代,2~3天换液1次
特别提醒:签收细胞后,如细胞状态不佳,或培养中遇到问题,烦请当天尽快联系,以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据,请务必重视。
一、 OK;负鼠肾细胞复苏
1. 把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。
3. 把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动,使培养皿中的细胞均匀分布。
4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。
5. 3天换一次培养基。
二、 OK;负鼠肾细胞传代
1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2. 把原有培养基吸掉。
3. 加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行),消化1-2分钟。
4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。
5. 用移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来。
6. 把细胞吸到15ml的离心管中,1000转离心5分钟。
7. 倒掉上清液,加1-2ml培养基,把细胞都吹起来。
8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般,癌细胞分5个,正常细胞传3个。继续培养。
三、 OK;负鼠肾细胞冻存
把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装到灭菌的冻存管中,静止几分钟,写明细胞种类,冻存日期。4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃过夜,然后放到液氮灌中保存。
冻存液的配制: 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加,边滴边摇。
要注意的就是无菌操作!
细胞培养常见问题及解决方法
问题 |
原因 |
解决方案 |
细胞生长缓慢 |
生长培养基使用不当 |
按照生产商的建议,使用相应的预热生长培养基。 |
生长培养基中血清质量差 |
使用其他批次血清。 |
|
传代操作不当 |
按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。 |
|
换液过于频繁 |
降低换液频率,参考生产商推荐的换液频率。 |
|
细胞传代次数过多 |
使用传代次数较少的健康细胞。 |
|
细胞生长超过汇合状态 |
哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行,建议细胞密度达 80-90%传代。 |
|
细胞被支原体污染 |
将细胞、培养基和试剂丢弃;新取一只冻存细胞,并且使用新的培养基和试剂。 |
|
细胞复苏存活率低 |
细胞冻存不当 |
新取一只冻存细胞,并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中,直至复苏。 |
自行制备的冻存细胞无活性 |
将细胞按照生产商推荐的密度冻存。 |
|
制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。 |
||
严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。 |
||
新取一只冻存细胞。 |
||
细胞复苏方法不当 |
严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。 |
|
确保冷冻细胞解冻迅速,接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。 |
||
复苏培养基使用不当 |
使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。 |
|
细胞稀释过度 |
按照生产商的建议,将解冻后的细胞高密度接种,以改善复苏效果。 |
|
处理细胞时动作不够轻柔 |
冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外),也不要高速离心细胞。 |
|
冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光 |
如果未避光储存,冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质;新取一只冻存保护剂,重新冻存细胞。 |