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1. 简介
iTRAQ技术是一种新的、功能强大的可同时对四种样品进行绝对和相对定量研究的方法。这种方法是建立在iTRAQ试剂的基础上。iTRAQ实际上是一种同位素标记试剂,包括一个带电荷的报告基团,报告基团有4种相对分子质量分别为114、115、116和117,另外还有一个肽段反应基团和一个平衡基团,平衡基团也有4种相对分子量分别为31、30、29和28。其中平衡基团平衡分子量,保证与每一种报告基因结合后iTRAQ试剂总的相对分子量都是145,肽段反应,基团可以同肽段的N末端和赖氨酸测量E氨基基团发生反应,这样可以标记生物样品中产生的所有肽段,增强任一给定蛋白的肽段覆盖度,同时保留了诸如一些蛋白的翻译后修饰的重要结构信息。
2. 技术特点和优势
(1)分离能力强、分析范围广、分析时间快、分离效果好;
(2)标记效率高;
(3)重复性较高,可以简化谱的复杂程度,提高离子强度;
(4)定性分析结果可靠,可同时给出每一个组分的分子量和丰富的结构信息;
(5)定性与定量同时进行
(6)iTRAQ技术不仅可发现胞浆蛋白,还有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。还可以
技术可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
3. 操作流程
(1)样品获取;
(2)蛋白提取及浓度测定;
(3)蛋白酶解;
(4)用iTRAQ试剂对酶解后的样品蛋白进行差异标记;
(5)混合标记的样本;
(6)结合多维色谱分离和2D液相色谱串联质谱进行分析;
(7)差异蛋白分析。
4. 样本要求
iTRAQ技术对检测标本有一定要求。它要求检测蛋白量最低不少于50ug,浓度最低不少于5ug/uL,否则同位素无法标记。而对蛋白提取试剂也要求使用普通的组织、细胞裂解液即可,切忌不要使用二维电泳试剂提取。
5. 技术应用
(1)广泛地应用于细菌、酵母、人体组织、细胞和体液等多种样本的蛋白质鉴定和定量;
(2)可以应用与比较野生型酵母菌株和两种同源突变型酵母菌株xmlv、upflv蛋白质表达差异;
(3)可以对多种蛋白混合物或重组的蛋白混合物进行精确地定量;
(4)可以进行多个时间点蛋白质组动态变化的监测;
(5)可以进行细胞周期、信号转导整个过程的蛋白质组动态变化检测。
服务项目 |
收费标准 |
备注 |
1.ITRAQ标记试剂盒 |
10000元 |
(1)若提供蛋白,则蛋白浓度要求5ug/ul,体 积要求至少50ul,总蛋白量至少100ug;直接提 供组织、细胞或菌体,需告知我们蛋白是抽提全 蛋白还是膜蛋白还是其他特殊蛋白; (2)细胞样本弃培养基PBS清洗后,液氮保存; (3)组织样本PBS清洗去除血迹后,液氮保存。 |
2.蛋白抽提、酶解,形成4组蛋白相 等的样品 |
5000元 |
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3.LTQ-obi-Trap实验,每次24小 时,重复3次 |
60000元 |
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4.人员仪器操作费 |
10000元 |
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5.数据分析费 |
10000元 |
备注: 样本处理:普通样本免费做样本前处理;特殊样本另外收取300元/样本处理费,如羊水、血清等需要去高 丰度蛋白的样本,特殊动植物组织(如骨头、木质部、果实、种子等),革兰氏阳性细菌,分泌蛋白,细胞 器蛋白(如叶绿体、线粒体、膜蛋白等),微量样本、寄生虫、病毒或其他具有强致病性的菌类。
武汉华联科生物技术有限公司
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