WI-38VA13；人胚肺细胞株

目录号	CC-Y1660
细胞英文(简称）	WI-38VA13
细胞名称	WI-38VA13；人胚肺细胞
背景资料	收到细胞，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快和我们联系。如包装完好，取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒,拆下封口膜,在显微镜下观察细胞形态是否正常，细胞的贴壁情况以及细胞密度,然后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置2-3小时，以稳定细胞状态。
细胞来源	ATCC
代次	P3
规格	T25
细胞数	1x10^6 cells
价格	电议
生物安全级别	2
组织来源	肺
细胞形态	贴壁
细胞活力	95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测	细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件	DMEM(高糖) +10% FBS；37℃，5% CO2
传代方法	建议1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件	90%FBS+10%DMSO

13. 细胞冷冻培养基之成份为何？
答：动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO 稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO 直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。

14. DMSO 之等级和无菌过滤之方式为何？
答：冷冻保存使用之DMSO 等级，必须为Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)，其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO 之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO 之Nylon 材质滤膜。

15. 冷冻保存细胞之方法？
答：冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
答：冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

16. 细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？
答：冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial，融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。

17. 应如何避免细胞污染？
答：细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。

18. 如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？
答：加入相应抗生素。直接灭菌后丢弃之。

19. 支原体(mycoplasma) 污染的细胞，是否能以肉眼观察出异状？
答：不能。除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨之。

20. 支原体污染会对细胞培养有何影响？
答：支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数，代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。

21. CO2 培养箱之水盘如何保持清洁？
答：定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。