-
- 地区
- 全部
-
- 会员级别
- 全部
用凯氏法测定蛋白质的含氮量相当恒定(约14%一18%),平均含量约为16%。因此,蛋白质氮乘以6.25%即为蛋白质含量。
如果实验需要时,也可以用以下方法直接测定。
测定的流程是,称取0.2-0.5g风干的植物材料,放入100ml烧杯中,加入50ml水,煮沸5min,在40-50℃下保温30min。徐徐加入10ml6%硫酸铜,摇匀,静置lh(或过夜)。过滤,残渣按凯氏定氮法将残渣消化,蒸馏,测定收集液中氨,计算得出含氮量。非蛋白质氮包括溶于水的氮化物,如氨基酸、酸性氮和有机含氮碱等。
其总量可以按总氮减去蛋白质氮计算得出,也可以按下法测定,即:称取0.2-0.5g植物样品,放入研钵中加2ml水,研磨成匀浆态。加入3ml3%硫酸铜溶液,摇匀,匀浆转移到离心管内,同时以8ml水冲洗净残渣。
离心管放入沸水中,用玻璃棒搅拌3min。取出加入3ml0.2mol/L的NaOH,搅匀,静放10min,离心。将溶液放入100ml凯氏瓶中,用热水冲洗沉淀2次,每次用10ml,每次冲洗时要向冲洗的水中加人l滴3%的硫酸铜溶液。
然后向凯氏瓶的浸出物中加入2ml浓硫酸,O.3m110%钼酸钠(10gNa2MoO4·2H2O溶解于100m1水中,加入0.5ml2mol/LNaOH,加热至沸,并煮沸15min,冷却后补充无氨水100ml),4滴3%过氧化氢。放在电炉上蒸发,直至出现泡沫,然后降低温度以免泡沫溅到瓶颈上。继续用微火加热直至硫酸出现白色蒸汽。
之后用球形玻璃塞塞上凯氏瓶口,增强火力,消化到溶液透明为止。冷却后向瓶中残留物加入10ml水。溶液转人50ml容量瓶中,用水冲洗残渣,并补加水到50ml,混匀。取25ml溶液放人烧杯中滴定。加1滴0.1%甲基橙溶液,冷却后,以2mol/LNaOH溶液滴定,直到指示剂呈现黄色为止,不能滴定过头。然后加10ml含有溴酸钾的pH6.7的磷酸缓冲液和5ml0.12mol/L氯氨溶液(15g氯氨溶于水中,用水稀释到1L,混匀,用棉花过滤后,装入暗色瓶中),即用玻璃盖盖住烧杯,以圆周运动方式将溶液混匀,并静置25min,其后加入2ml2%碘酸钾溶液,10m18%草酸溶液。
在有淀粉指示剂存在下,用0.02mol/L硫代硫酸钠溶液滴定释放出来的的碘。1ml0.02mol二硫代硫酸钠相当于0.09338mg氮。另按此法设不加样品的对照,操作步骤完全与上相同。
最后按下面公式计算样品中的非蛋白氮含量。
X(非蛋白氮含量%)=[0.4667×50×K×(6z-6)1/(25×7n) =[0.9338×K×(a-b)]/72
式中:
50为试液体积(ml);
25为用氯氨法测定时所取试液的体积(ml);
a为滴定对照所用去的0.02mol二硫代硫酸钠体积(ml);
b为滴定试液所用去的0.02mol/L硫代硫酸钠体积(ml);
K为硫代硫酸钠溶液的滴定度372为分析的样品重。