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产品名称:CDT1 ELISA
类别 :ELISA
货期 :7-10天
CDT1 ELISA注意事项:
收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时,-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分标本需添加抑肽酶。
1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
2. 加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的 “预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。
3. 孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4. 洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。
5. 试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7. 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。
建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。
洗板方法
1. 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此过程数次。
2. 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
液体类标本:
标本必须为液体,不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积=100ul×检测种类。
◇ 血清:
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
◇ 血浆:
应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,加入10%(v/v)抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
◇ 尿液、胸腹水、脑脊液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
◇ 细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
◇ 组织标本:
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清置于-20度或- 70度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
寄标本时需注明以下情况:
1、标本编号;2、所测项目;3、是否做复孔;3、实验后标本是否寄回
化试剂、ELISA试剂盒、抗体和抗原、细胞因子、技术服务、实验耗材和消耗品以及仪器设备。
1. 收到细胞株(TKB-1细胞)包裹时,请检查细胞株(TKB-1细胞)冷冻管是否有解冻情形,若有请立即通知。细胞株(TKB-1细胞)请尽速开始培养,或立即冷冻保存(置于-70 ℃,隔夜后,移到液氮)。
2. 冷冻细胞解冻程序:
2.1. 依据细胞株(TKB-1细胞)数据单指定之基础培养基种类、血清种类和其它指定之成份和比例, 制备培养基。绝大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之 血清种类,若因实验需要,必须有所不同时,务必以缓慢比例渐次改变培养基组成, 确定细胞适应后, 方进行所需之实验。
2.2. FBS (fetal bovine serum,胚牛血清),CS (calf serum,小牛血清)和HS (horse serum,马血清),对细胞而言差异极大,请务必依据细胞株(TKB-1细胞)资料单指定之血清种类培养之。
2.3. 将培养基置于37 ℃ 水槽中回温,回温后喷以70 % 酒精并擦拭之,移入无菌操作台内。取出冷冻管,立即放入37 ℃ 水槽中快速解冻,水面高度不可接近或高过冷冻管之盖沿,否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化后,以70 % ethanol 擦拭冷冻管外部, 移入无菌操作台内。
2.4. 依据细胞种类和浓度,于无菌操作台内取10 ml 培养基加至T25 或T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液,缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基,混合均匀,放入37 ℃,5 % CO2 培养箱培养。
2.5. 对绝大多数细胞而言,1 % 以下之冷冻保护剂DMSO,不会对细胞之贴附或活 化有不佳影响,不需立刻由解冻细胞中去除, 待第二天确定细胞生长或贴附良 好后再去除即可。惟对极少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞,需 立即去除DMSO 者, 则可将解冻后之细胞悬浮液放入5 - 10 ml 培养基中,离心300 xg (约1000 rpm),5 分钟,小心移去上清液,加入适量新鲜培养基,将细胞均匀混合后,转移至培养瓶中,再放入37 ℃,5 % CO2 培养箱培养。收到T25 flask 细胞时,处理方式为:
2.5.1. 于寄送过程中,为避免起泡造成细胞脱落死亡,T25 flask 均加满培养基。请检查flask 外观,并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象,若有任何问题, 不要打开盖子,请立即通知细胞实验室。
2.5.2. 将原封之T25 flask 静置于37 ℃,5 % CO2 培养箱中,使细胞回温至37 ℃,并让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。隔天后,于无菌操作箱内取出flask 内之培养基,(取出之培养基可以再使用),仅留约5-10ml 培养基于flask 内,依一般培养方式再将细胞置入培养箱中,或细胞已长满盘, 则将细胞做传代培养。
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