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ELISA酶联免疫试剂盒特异性好,灵敏度高。
它的方法类型和操作步骤如下:ELISA可用于测定抗
原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的
试剂:①固相的抗原或抗体,②酶标记的抗原或抗体,③
酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的
具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。
(一)双抗体夹心法
双抗体夹心法:是检测抗原最常用的方法,操作步
骤如下:
(1)将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体
:洗涤除去未结合的抗体及杂质。
(2)加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时
间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相
抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
(3)加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶
标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体
上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
(4)加底物:夹心式复合物中的酶催化底物成为有
色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
根据同样原理,将大分子抗原分别制备固相抗原和酶
标抗原结合物,即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。
(二)双位点一步法
在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上
两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶
标抗体,则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两
步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作,缩短了反
应时间,如应用高亲和力的单克隆抗体,测定的敏感性和
特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的
ELISA提高到新水平。
在一步法测定中,应注意钩状效应(hookeffect),
类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗
原浓度相当高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结
合,而不再形成夹心复合物,所得结果将低于实际含量。
钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。
(三)间接法测抗体
间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标
记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接
法。操作步骤如下:
(1)将特异性抗原与固相载体连接,形成固相抗原
:洗涤除去未结合的抗原及杂质。
(2)加稀释的受检血清:其中的特异抗体与抗原结
合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只
留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不
能与固相抗原结合,在洗涤过程中被洗去。
(3)加酶标抗抗体:与固相复合物中的抗体结合,
从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后,固相载体上的酶
量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体
,可用酶标羊抗人IgG抗体。
每个试剂盒操作是不同的,请按说明书操作。具体
事项请来电咨询!
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