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公司名称:上海拜沃生物科技有限公司
所在地:上海杨浦
发布时间:2014-06-16
联系人:黄力
产品简介
免疫组化IHC/病理切片/HE染色/原位杂交技术服务
拜沃生物专注实验外包,代做各类生物学医学实验。是一家专业从事生物技术研发并提供相关技术服务和产品的高新技术企业。公司目前提供的技术服务和产品主要包括分子生物学技术服务、腺病毒(Adenovirus)、慢病毒(Lentivirus)包装服务,公司已建立了涵盖分子遗传学、细胞生物学、蛋白组学、免疫学、信号传导和神经生物科学等领域的产品技术平台.
产品详情
免疫组化;H.E染色;病理切片
上海拜沃生物为您提供 免疫组织化学IHC ,免疫细胞化学ICC ,原位分子杂交ISH 等组织形态学方面的一站式技术服务,包括实验设计、实验操作、图片采集,实验结果分析等方面,也可以承接阶段性的技术服务。检测指标:肿瘤标志物、癌基因及抑癌基因蛋白、细胞周期蛋白、凋亡基因蛋白、细胞表面抗原等。 样本及来源:石蜡切片、冰冻切片、细胞涂片或培养细胞;来源于人、小鼠、大鼠或其它。
1、组织的石蜡包埋与石蜡切片:
(1) 客户提供人或动物的新鲜或福尔马林固定的组织,我公司负责进行石蜡包埋与组织切片
(2) 客户提供人或动物的石蜡包埋组织及处理好的玻片,我公司制备石蜡切片,收费标准为
2、细胞片:
客户提供生长良好的一瓶细胞,本公司提供传代培养的所有器材和处理好的玻片,制备细胞爬片,每批可提供10 张左右细胞片。
3、常规HE 染色:
客户提供石蜡或冰冻切片。
4、免疫组织化学实验服务:
方法:使用HRP 标记系统进行检测
项目 |
单位 |
价格(元/ 人民币) |
备注 |
病理片免疫组化 |
张 |
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病理片免疫组化 |
张 |
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7、其他实验:
1、石蜡包埋
2、HE染色,其他染色
3、脱钙:50元/标本(脱钙标本免除包埋费)
4、特殊染色:60元/片子
●说明:
1、 用户委托我公司进行免疫组织化学检测实验时须预付实验费50%。
2、 用户应说明检测目的、所选检测系统等,一次送检样本数不应少于10张切片。我公司在正式接受实验委托三周左右交付实验结果。所提供实验结果忠实于样本的实际情况。
3、 进行免疫组化检测实验所需的检测系统(不含一抗)由我公司免费提供,一抗须用户自行购买或委托我公司代购;用户所提供抗体应可与样本发生特异性识别反应。免疫组化检测显色系统分为辣根过氧化物酶-DAB体系及碱性磷酸酶-BCIP/NBT体系。
由于用户提供的样品或试剂所致的实验问题由用户负责。我们的委托人可保留对于选择的服务的所有知识产权,每个项目都是在绝对保密的情况下进行的。
免疫组化实验技术对外服务步骤
简介:
免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫 细胞化学技术(immunocytochemistry)。
免疫组化的分类:
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。
免疫组化主要步骤
1. 洗载玻片: 将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中,目的是为了是载玻片上的硅胶等除去,同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整,便于组织吸附,然后置于 清水中清洗,除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4(大约冲一个小时左右),再将载玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上,置于37°C温箱中,将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面,由于Lys带正电,而大多数的组织带负电荷,从而产生吸附作用。
2. 包埋组织: 先在铁模具中加入一些液态石蜡,先稍微冷却,然后再将待包埋的组织置于石蜡之中,并排列整齐,再将塑料模具盒盖上,最后加入少许液体石蜡,进行冷冻,使石蜡变成固态。
3. 切片: 将包埋好的组织从模具上取下来,并置于石蜡切片机上,切片机通过调节上下左右来来使组织和切割方向一致,然后调节切片的厚度,一般为5µm,如果比较难切,则可以适当调整厚度,用毛笔将切割的载玻片向外拉,并用小镊子将包含有完整组织的载玻片置于40°C温水中。
4. 捞组织: 当组织载玻片置于40°C温水中之前,要先将水浴中的气泡赶走,以免气泡受热上浮而贴到组织上,组织受热展开,最好是组织不起皱纹,用载玻片捞组织时,一 般取载玻片的下1/3或者下1/2一般每种组织捞5-6张,其中2-3张是备用的,每张载玻片上通常捞两份组织,做对照使用,这样形成的误差就比较小了, 而且捞载玻片的时候最好方向一致,以便观察,再将捞出来的载玻片置于架子上,放入37°C温箱中烘干。
5. 脱蜡: 依次将载玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精,起脱蜡作用的主要是二甲苯,依据的是相似相溶的原理.一般在每个试剂中放10min,天气热可以少放几分钟,相反,天气较冷的话,就要适当延长脱蜡时间,一般为12-15min.
6. 抗原修复: 脱蜡后在清水中冲洗一段时间,加入3%H2O2浸泡10min,从而除去内源性的过氧化氢酶,然后倒掉H2O2,在清水中洗两次,再加入柠檬酸缓冲液,放 入微波炉中蒸煮3min(中火),一般刚到沸腾即可,冷却至室温,然后再蒸煮一次,冷却至室温,蒸煮的目的是为了使抗原的位点暴露出来。
7. 血清封闭: 冷却至室温后,将柠檬酸缓冲液倒掉,水洗2次,并将载玻片置于PBS中5min,洗2次,擦干组织周围的PBS液,马上加上血清,使一些非特异性的位点封 闭起来,然后放入37°C温箱中半小时。血清稀释10倍(900µlPBS:100µl血清封闭液)。
8. 加一抗: 将温箱中的载玻片取出,用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围的血清,加一抗,如果做对照实验,就在对照的组织上加PBS。加完一抗后于4°C冰箱中保存过夜。
9. 加二抗: 将载玻片从冰箱中取出,放入PBS中洗3次,每次5min,擦干组织周围的PBS后加上二抗,然后置于37°C温箱中半小时。
10. 加SABC: 将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次,每次5min,擦干组织周围的PBS后加上SABC, 然后置于37°C温箱中半小时。SABC稀释100倍(990µlPBS:10µlSABC)。
11. 加显色剂: 将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次,每次5min,擦干组织周围的PBS后加上显色剂。(显色剂的配置:在1ml水中加1滴显色剂A,摇匀,然后加1滴显色剂B,摇匀, 再加1滴显色剂C,摇匀) A:DAB B:H2O2 C:磷酸缓冲液
12. 复染: 将显色后的片子用清水冲洗一段时间后,浸泡于苏木精中染色,一般动物组织为半分钟,植物组织3-5min。
13. 脱水:将复染后的片子置于水中冲洗后,依次将载玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯。每个试剂中放置2min,最后浸泡在二甲苯中,搬到通风柜中。
14. 封片: 用中性树胶滴在组织旁边,再用盖玻片盖上,要先放平一侧,然后轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好片子后置于通风柜中晾干。
免疫组化的相关试剂:
最重要的是选择好一抗、二抗或者还有三抗,注意抗体的特异性、效价和交叉反应,最好用单抗。
其他常用试剂有:
1、0.01M(pH7.4)的磷酸盐缓冲生理盐水(PBS),稀释抗体和洗片子用;
2、清洁液、纯水,洗玻片用
3、多聚赖氨酸处理载玻片,防止脱片
4、固定液:4%多聚甲醛或冷丙酮等;
5、15%~30%蔗糖,组织脱水用;
6、梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋,或者OCT包埋做冰冻切片;
7、抗原修复液:枸橼酸缓冲液(pH6.0);
8、活化剂:EDTA或者Triton X-100;
9、1%~10%牛血清清蛋白(BSA)封闭液;
10、H2O2,灭活内源性过氧化物酶;
11、显色液:根据你做的酶来选择,如果是HRP就用DAB,如果是AKP,就用NBT/BCIP,免疫荧光则不需要;
12、50%缓冲甘油封片液。
免疫组化IHC/病理切片/HE染色/原位杂交技术服务
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