人血清生长激素放免测定盒操作说明书
HGH(FK-037) RIA KIT
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人血清生长激素(HGH)放免试剂盒,HGH RIA KIT
临床意义:
生长激素(HGH)是垂体前叶分泌的糖蛋白激素,分子量为21500,含有191个氨基酸。生长激素是一种调节物质代谢的重要激素,它主要作用是促进肝脏释放葡萄糖,促进脂肪氧化分解,促进蛋白质合成,刺激颅骨、下颌骨增大及软骨肥大、骨骺软骨增生,促进某些肿瘤生长及刺激泌乳。
测定原理:
本药盒利用放射免疫分析方法进行测定。在均相竞争抑制反应中采用饱和平衡法,对病人血清样品中GH进行直接测定。测定中,标准品、样品等中的GH与125I-GH竞争限量抗血清的结合位。当被测物中GH的浓度高时,剩余的抗血清结合位就少,从而与抗血清结合125I-GH就少,反之结合就多。利用免疫分离剂分离出抗原-抗血清复合物,并测定复合物中的放射性计数。125I-GH的结合量与样品中GH浓度呈函数关系,通过数据处理可求出样品中GH的含量。
标本采集:
取晨空腹的静脉血,分离血清,放2-8℃可保存一周。如不立即测定,血清样品必须在-20℃保存,且不超过30天,应避免反复冻融。严重溶血的样品影响测定结果。
药合组成及配制:
1、 125I-HGH 1 瓶。使用时用 ml缓冲液溶解(如不填写,100管用10ml,50管用5ml
缓冲液溶解)
2、 HGH抗体 1 瓶。
3、 HGH标准品 6 瓶,使用时每瓶用1.0ml缓冲液溶解。其浓度分别为0、1、3、9、20、50ng/ml。
4、 分离剂(第二抗体) 1瓶。
5、缓冲液1瓶。
以上各组份试剂应在使用前配制且摇匀使用。
操作方法:
试管编号,按下表程序操作。
HGH RIA 加样步骤 ( 单位: ul)
管 别 | 缓冲液 | 标准品 | 样品 | 125I-HGH | 抗血清 | 混匀,37℃放置过夜,任取三管测总T(CPM)。 | 分离剂 |
NSB管 | 100 | 100(S0) | -- | 100 | -- | 1000 |
S0管 | -- | 100 | -- | 100 | 100 | 1000 |
S1-S末管 | -- | 100 | -- | 100 | 100 | 1000 |
样品管 | -- | -- | 100 | 100 | 100 | 1000 |
混匀,室温放置20分钟,离心(3500转/分)15分钟,吸弃上清液,测定各管沉淀的放射性计数(CPM)。
数据处理:
1、 计算机处理:建议函数模型采用三次多项式或log~logit法。
2、 计算、绘图法:
计算各管的百分率:以S0(cpm数)为B0,各标准管Si(cpm数)为Bi,求各管的百分结合率。
Bi Bi管(cpm)— NSB管(cpm)
— %= —————————————— ×100
B0 B0管(cpm)— NSB管(cpm)
(1)线性回归:用logX~logitY回归,求出r、a、b值,样品含量可由下式计算得出。
- a +logit Y
Log X= ————
b
(2)绘图法:用各标准点计算的结果,在log~logit坐标纸上绘制标准曲线图,未知样品浓度可根据Bi/B0的百分结合率从标准曲线图上查出。
正常叁考值:
各实验室应建立自己的正常值,下列正常参考值仅供参考:
HGH<5ng/ml
技术特性:
1、曲线范围:(1~50)ng/ml
2、灵敏度: < 0.5ng/ml
3、特异性:HGH抗血清与HRL的交叉反应<9×10-3
4、精密度:批内CVw<9%,批间CVb<13%
保存及有效期:
药盒于(2~8)℃避光保存,切勿冻存。自检定合格之日起有效期为45天。
药盒参考数据:
指标 | B/T(%) | Bi/B0(%) |
项目 | NSB | S0 | S1 | S末 |
参数 | | | | |