-
- 地区
- 全部
-
- 会员级别
- 全部
1. 原理
免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查组织内的相应抗原(或抗体)。在组织中形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素,荧光素受激发光的照射,由低能态进入高能态,而高能态的电子是不稳定的,以辐射光量子的形式释放能量后,再回到原来的低能态,这时发出明亮的荧光,利用荧光显微镜可以看见荧光所在的组织,从而确定抗原或抗体的性质和定位,以及利用定量技术测定含量。免疫荧光技术分直接法、间接法和补体法,最常见的为间接法。
在同一细胞标本上需要同时检测两种抗原时,需进行双重荧光染色,称为免疫荧光双标。用未标记的两种特异性第一抗体孵育细胞,洗去多余的第一抗体后,再用两种不同的荧光素分别标记的第二抗体孵育细胞,洗去多余的第二抗体,后在荧光显微镜下分别选择两种相应的激发滤片观察,从而对两种抗原进行定位和定量。使用此法应注意两种特异性第一抗体必须来源于不同种属,且荧光标记第二抗体的种属必须与第一抗体的种属相匹配。
2. 实验步骤
(1)石蜡切片脱蜡至水,或者制作的冰冻切片用冷丙酮在4℃固定10-20分钟;
(2)抗原修复,冰冻切片无需修复;
(3)用0.01M PBST漂洗3次,每次5 min;
(4)滴加正常的血清室温封闭30 min;
(5)加未标记的特异性混合一抗体,4℃过夜;
(6)用0.01M PBST漂洗3次,每次5 min(震荡漂洗);
(7)加荧光标记的混合二抗抗体,37℃湿盒避光作用30 min;
(8) 0.01M PBST避光漂洗3次,每次5 min;
(9)甘油缓冲液封片;
(10)荧光显微镜观察。
3. 注意事项
(1)荧光染色后一般在1 h内完成观察,或于4℃保存4 h,时间过长,会使荧光减弱;
(2)每次试验时,需设置以下三种对照:
阳性对照:阳性血清+荧光标记物
阴性对照:阴性血清+荧光标记物
荧光标记物对照:PBS+荧光标记物;
(3)加入荧光二抗后,操作尽量在暗室中进行;
(4)抗体浓度和孵育时间需要事先摸索;
(5)两种一抗要来源于两种不同的动物;
(6)二抗用两种不同荧光信号标记,且各自信号相互不干扰或干扰性小。
注意事项:
服务项目
收费标准
样本要求
备注
组织免疫荧光(IF)---双标
160元/样本/指标
切片
客户提供一抗,本价格包含拍照及染色,不包含特殊分析
1.新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上;
2.取材切面要平整,厚度不宜超过2mm;
3.请明确拍照部位及拍照倍数(一般为40X、100X、200X、400X)。
![](http://zt.yzimgs.com/ComFolder/641360/image/201609/201609091411919051.png)
武汉华联科生物技术有限公司
公司电话:400-990-9795
公司传真:
公司邮箱:myhalic@163.com
地 址:武汉市江夏区汤逊湖红旗岛中建汤逊湖壹号E206栋
- 询价产品:组织免疫荧光(IF)---双标
- 询价数量: /个
- 联系人:
- 联系电话: