1、 细胞转染试验

技术服务详细描述

脂体转染

质脂体为人工膜泡，可作为体内，体外物质转送载体。将需转移的DNA或RNA包裹于质脂体，由于质脂体具有磷脂双层与胞膜相似，因此，可与细胞膜融合，将DNA转入宿主细胞。影响转染效率差异的主要原因是细胞系间个体的差异，有的细胞系细胞膜通透性较好，质脂体复合物较容易进入细胞，转染效率就高。又有的细胞系本生就不容易被转染。其次脂类与DNA形成易于转染结构的特性存在负面效应。其中主要的问题是毒性，表现为细胞聚集在一起，从壁上脱落。另为脂质体转染易于受到血清中的脂肪与脂蛋白以及细胞外基质中带店成分，如硫酸软骨素等干扰引起细胞死亡从而影响转染效率。

电穿孔转染

  核酸不能自动进入细胞，需要协助才能穿过细胞壁的物理屏障进入能够进行表达和/或复制的胞内位点。电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔。电穿孔的主要应用优势是适用的细胞范围广，不论真核细胞还是原核细胞都能被有效转染。当遇到某些脂质体转染效率很低和几乎无法转入时建议用电穿孔法转染。

一般情况下，高电场强度会杀死50%-70%的细胞。这种致命的后果根据细胞系的不同而异，与加热或电解无关，也与当时施加的能量与密度无关。相反，细胞死亡与电场强度与整体作用时间相关。

细胞转染试验


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