人白细胞间介素4酶免试剂盒 E0900107

Human-Interleukin 4 ELISA KiT

人白细胞间介素4

产品编号：E0900107

概述

使用前彻底阅读说明书。IL-4，白介素-4。IL-4由活化T细胞、肥大细胞和中性粒细胞产生。IL-4首先被发现对骨髓来源的T细胞有生长促进作用。此后，发现IL-4的作用谱越来越广，包括对T、B细胞、肥大细胞、NK细胞、LAK细胞、单核巨噬细胞和少突胶质细胞都有直接的促进生长和分化作用。作用通过细胞膜上的IL-4受体而实现。本酶联免疫试剂盒是基于经典酶联竞争技术原理，能测量人IL4含量，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。

工作原理

所提供的ELISA Kit是典型的竞争法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。试剂盒中将抗IL4抗体包被在微孔板上，酶联亲和物中含有标记了过氧化物酶的IL4。试验过程中，标准品、待测样本中的IL4与标记有酶联亲和物的IL4共同竞争反应板上包被的抗IL4抗体的定量结合位点。反应后冲洗掉未结合的部分，再加入底物反应，底物在酶的作用下变为蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。通过比较待侧样本与IL4标准品的吸光度，可准确测得样本中的IL4含量。

试剂盒组分

材料	96 test / 48 test
已稀释完的标准品	1ml×6瓶
预包被抗体的微孔板	96T（一块）/48T（一块）
酶联亲和物	6ml×1瓶 / 3ml×1瓶
显色液A	6ml×1瓶 / 3ml×1瓶
显色液B	6ml×1瓶 / 3ml×1瓶
终止液	6ml×1瓶 / 3ml×1瓶
ELISA专用洗涤液	50ml×1瓶 / 25ml×1瓶【1:10倍蒸馏水稀释】

需要而未提供的试剂和器材

1． 37℃恒温箱。

2． 标准规格酶标仪。

3． 自动洗板机。

4． 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。

5． 蒸馏水，容量瓶等

6． 干净的试管

注意事项

1． 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟；

2． 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管；

3． 本试剂盒中不含有传染性试剂，仅供科研体外诊断使用；

4． 有效期内使用，不可混用不同批号的试剂及包被微孔板；

5． 试验过程中必须充分混匀；

6． 冲洗过程中必须冲洗充分、扣干，否则将影响结果精确度；

7． 包被微孔板必须干燥保存，避免受潮；

8． 试验完毕后，将剩余试剂放置2-8℃保存；

9． 试验过程中必须严格按照说明书进行操作，顺序不得颠倒；

10． 大量样本操作时，应注意加样时间，避免加样缓慢或间隔时间过长；

11． 储存和使用显色B液时应避光；

12． 试验过程中，室温应始终保持在18-28℃；

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；重复此过程5次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

样品的准备和保存

样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存（-20℃），且避免反复冻融。

血清——用干净试管收集血液后尽快将血清和红细胞通过离心分离，收集血清。若短时间内分析，可存放在2-8℃。

细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

本试剂盒提供的标准品及其他组份为方便用户使用均为已按照试验标准稀释过的。

标准品

12 pg →S0

60 pg

120 pg

240 pg

600 pg

1200 pg

正常情况下所绘制的标准曲线应为自上向下的一条直线。

操作程序

1． 试验前将试剂盒及待测标本放置室温平衡（18-28℃）并确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。

2． 将标准品各100μl依次加入一排孔中，处理后的标本按100ul每孔加入，并做好标记。

3． 在标准品孔及待测样本孔中分别加入50μl酶联亲和物，充分混匀。

4． 37℃温育60分钟后充分弃尽各孔内液体，用稀释好的洗涤液反复冲洗5次并扣干孔内剩余水份。

5． 每孔依照次序，分别加入显色液A、显色液B各50μl，充分混匀，在室温下避光反应15分钟。

6． 反应过后（正常情况下应为蓝色并带有明显的梯度）每孔加入终止液50μl，充分混匀（正常情况下应转变为蓝色），终止反应。

7． 用酶标仪在450nm测定O.D.值。

结果计算

1. 分别计算各标准品及待测样本的S/S0%数值

S=标准品或样本O.D值

S0=上图所示S0点O.D值

2. 以标准品浓度作为横坐标，S/S0%数值为纵坐标，在对数坐标纸上绘制标准曲线

3. 在绘制好的标准曲线图上查找每个样本所对应的浓度

操作程序总结：

准备试剂，样品和标准品

加入准备好的样品、标准品以及酶联亲和物，37℃温育反应60分钟

洗板5次，加入显色液A/B室温避光反应15分钟

加入终止液，终止反应

30分钟之内读O.D值

计算标本待测因子含量

检测范围：12pg/ml→1200pg/ml

敏感性： ＜3.0pg/ml

特异性： 系统和其它细胞因子无交叉反应。

有效期： 6个月（2→8℃保存）

检测介质：血清或血浆

重要说明：

1. 如试验需要做空白对照孔，则需先预留一个孔并做好标记，但孔内不能加入任何样本。随标准孔和待测样本孔一起温育。显色过程显色液A、B以及终止液都照常按说明书要求去做，清洗过程也照旧，但切记要清洗充分。然后在450nm下读取O.D值即可。

2. 清洗过程一定要充分彻底，否则会影响精度对结果造成一定程度的影响。

REFERENCES

1、 Noguchi, M.et al.(1993) Science 262:1877.

2、 Kondo, M.et al.(1993) Science 262:1874.

3、 Hilton, D.J.et al.(1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:497.

4、 Lin, J-X.et al.(1995) Immunity 2:331.

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6、 Fanslow, W.C.et al.(1990) Cytokine 2:398.

7、 Fernandez-Botran, R.et al.(1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:4202.

8、 Ruhl, S.et al.(1993) Cytokine 5:144.

9、 Yokata T.et al.(1986) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:5894.

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