本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

人Ⅰ型胶原吡啶交联终肽（IICCTTPP）定量检测试剂盒（EELLIISSAA）

                                 使用说明书

【试剂盒名称】

 人Ⅰ型胶原吡啶交联终肽（ICTP）定量检测试剂盒（ELISA）

【试剂盒用途】

定量检测人血清、血浆及相关液体样本中Ⅰ型胶原吡啶交联终肽（ICTP）的含量。

【检测原理】

本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预

先包被人Ⅰ型胶原吡啶交联终肽（ICTP）单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，

洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依

次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸

的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人Ⅰ型胶原吡啶交联终肽（ICTP）浓度呈正相关，

450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人Ⅰ型胶原吡啶交联终

肽（ICTP）含量。

【试剂盒组成】

   1  酶标包被板              12孔×8条         7    显色剂A液        6mL

   2  标准品                   0.3mL×6管         8    显色剂B液        6mL

   3  20倍浓缩洗涤液       25mL               9    终止液              6mL

   4  样本稀释液              6mL                10  说明书                1份

   5  特殊稀释液              6mL                11  封板膜                2张

   6  酶标试剂                 6mL                12  密封袋                 1个

备注：标准品（1号→6号）浓度依次为：8、4、2、1、0.5、0.25μg/L

【需要而未提供的试剂和器材】

  1、37℃恒温箱

  2、标准规格酶标仪

  3、精密移液器及一次性吸头

  4、蒸馏水

  5、一次性试管

  6、吸水纸

【操作步骤】

 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

 2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、

待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先

加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸

上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸
上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，平板混匀器混匀30s

（或用手轻轻震荡混匀30s），37℃避光显色15min。

10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。

11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。

12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样

本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓

度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【样本要求】

1、样本不能含叠氮钠（NaN），因为叠氮钠（NaN）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即

试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。

5、本试剂盒定量范围为0.25-8μg/L，超过此范围，为标准曲线延伸计算所得，不做为准确

定量结果，请用特殊稀释液稀释后测定准确结果（0.25-8μg/L范围内），乘以总稀释倍数即为

样本最终浓度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、

样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。

8、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。

9、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

【操作程序总结】

1）准备试剂，样品和标准品

2）加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

3）洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

4）洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

5）加入终止液

6）15分钟之内读OD值

7）计算

【规格】

96人份/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】