SNP检测

SNP

本公司推出多种SNP分型服务的方法：直接测序方法、连接酶检测反应(LDR)方法、多重SNaPshot SNP方法、MassArray方法以及Taqman探针方法，为广大客户提供多样的选择！

1.连接酶检测反应(LDR)分型方法

技术原理：主要应用连接酶检测反应 (ligase detection reaction，LDR)技术。即在Taq DNA连接酶的作用下，当左右两条寡核苷酸探针与目的DNA序列互补，并且两条探针之间没有空隙时才能发生连接反应，否则连接反应不能进行，后通过荧光扫描片段长度，实现对SNP 位点的检测。

原理及实验流程示意图：

2.多重SNaPshot SNP分型方法

技术原理：SNaPshot SNP分型是一种以单碱基延伸原理为基础，同时利用多重PCR对多个已知SNP 位点进行遗传分型的方法。在一个含有测序酶，四种荧光标记的ddNTP，紧挨多态位点5’端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中，引物延伸一个碱基即终止，经ABI 3730 测序仪跑胶后，根据峰的颜色可知掺入的碱基种类，从而确定该样本的基因型，根据峰移动的胶位置确定该延伸产物对应的SNP位点。

原理及实验流程示意图：

3.MassArray SNP分型方法

技术原理： Sequenom MassArray系统主要是利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI-TOF MS) 进行分析，即PCR扩增产物或者预处理样本在延伸单碱基后，将制备的样品分析物与芯片基质共结晶，将该晶体放入质谱仪的真空管，而后用瞬时纳秒 (10-9s) 强激光激发，由于基质分子经辐射吸收能量，导致能量蓄积并迅速产热，从而使基质晶体升华，核酸分子就会解吸附并转变为亚稳态离子，产生的离子多为单电荷离子，这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能，进而在一非电场漂移区内按照其质荷比率得以分离，在真空小管中飞行到达检测器。

原理及实验流程示意图：

4.直接测序法

技术原理：将待检测片段进行PCR扩增并直接测序是SNP检测方法中准确的方法。纯合位点为单峰，而杂合峰为套峰，因而很容易将几种基因型区分开来。直接测序法不仅可用于对已知位点的检测，还可用于发现未知的SNP位点。

原理及实验流程示意图：

5.Taqman 探针方法

技术原理：在PCR 反应系统中加入2 种不同荧光标记的探针，它们可分别与2个等位基因配对。正常情况下，由于探针5′端荧光基团和3′端淬灭基团紧邻在一起，荧光被淬灭。随着PCR 的有效进行，与模板配对的探针逐步被Taq DNA 聚合酶5′→3′外切酶活性切割，致使探针5′端上的荧光基团与3′端的淬灭基团分离，淬灭效应解除，报告荧光基团被激活；而与模板不能配对的探针（代表另一种等位基因）不能被有效切割，故检测不到荧光信号，通过相应仪器检测荧光值的变化即可实现SNP位点检测。

原理及实验流程示意图：