PA317(小鼠成纤维细胞)

细胞名称：PA317     小鼠成纤维细胞

组织来源：胚胎

培养条件：DMEM +10% FBS

形       态：贴壁；成纤维细胞样

背       景：PA317细胞株源自TK- NIH/3T3细胞，通过pBR322中的包装结构DNA(pPAM3)和pBR322中的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因共同转染构建而成。 通过感染或转染将逆转录病毒载体导入这些细胞，结果生成可以感染许多哺乳动物细胞的双嗜性载体颗粒。 这株细胞生成的病毒颗粒已成功地用于将基因导入人类。 可能因为用于构建这株细胞而转入的DNA丢失，能够包装逆转录病毒载体的PA317细胞百分比随传代而减少。 在包含0.03 mM 次黄嘌呤, 0.001 mM 氨甲喋呤和0.02 mM 胸苷的培养基中短暂(大约5天)选择，可以选出保留了包装功能的细胞。 选择后，细胞应在HT培养基(0.03 mM 次黄嘌呤,0.02 mM 胸苷)中培养4天，以稀释残留的氨甲喋呤。

PA317(小鼠成纤维细胞)操作说明：

1)对于常温运输的细胞，收到细胞后，检查是否有运输问题，即细胞培养瓶或管是否破损，细胞培养液是否溢出。若没有运输问题，请75%酒精消毒后，保留封口膜，放入细胞培养箱中静置。严格检查培养箱的参数：温度，湿度和CO2浓度。细胞静置时间一般为6-12小时后，细胞状态稳定后，即可开始后续操作。选用正确的细胞培养体系，PA317(小鼠成纤维细胞)严格按照说明书的培养条件进行培养。条件允许，培养的前三天内做细胞拍照记录，通过邮件发送给我们做及时状态跟踪。

2)对于干冰运输的细胞，请取出冷冻管后，须立即放入37C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。然后将其复苏培养，次日更换培养液。

PA317(小鼠成纤维细胞)注意事项：

1)细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

2)对于生长缓慢的贴壁细胞：可采用适当的提高培养基中血清浓度，或隔日换液的方法来保证细胞的状态和生长速度。

3)对于生长不均的贴壁细胞：在培养过程中若出现细胞分布明显不均时（即某一区域细胞已重叠生长，而旁边则为一块空白），此时可将细胞进行消化，重新打散，贴壁，加入新培养基进行培养。 

PA317(小鼠成纤维细胞)下面介绍几种细胞培养过程中常见的污染：

一)杆菌污染：培养基中加入抗生素可以减少此种污染，但也不是绝对的。

二)支原体污染：传说中的黑焦虫，长得暴快。24小时就满视野都是了。污染源大多数情况下是培养用血清。

三)念珠菌污染：似乎无处不在，而且顽固得很。长得暴快(12h就能在细胞上面密布)。培养液澄清。低倍显微镜下像黑色的沙子铺在细胞上，高倍镜下呈树枝状或葡萄状。

四)霉菌污染、比较常见的一种污染，常常来源于污染的空气、水和器械。