硼酸盐缓冲液实验原理：

RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的RNA必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度变性剂TRIzol，可溶解蛋白质，破坏细胞结构，使核蛋白与核酸分离，失活RNA酶，硼酸盐缓冲液所以RNA从细胞中释放出来时不被降解。细胞裂解后，除了RNA，还有DNA、蛋白质和细胞碎片，通过氯仿、异丙醇等有机溶剂处理得到纯化、均一的总RNA。

硼酸盐缓冲液实验目的：

1．掌握真核生物细胞基因组RNA制备和定量的基本方法。

2．掌握反转录PCR的原理及实验方法。

3．掌握PCR技术原理和基本实验步骤。

实验仪器和材料：

低温冷冻离心机、烤箱、制冰机、移液器、冰箱，水平电泳槽、电泳仪、匀浆器、TRIzol、 氯仿、异丙醇、75％乙醇（DEPC H 2 O）配制、DEPC H 2 O

硼酸盐缓冲液实验步骤：

1. 取50－100mg（新鲜或－70℃及液氮中保存的组织均可）置1.5ml匀浆器中，加入1ml TRIzol充分匀浆，室温静置5min。

2. 加入0.2ml氯仿，振荡15s，静置2min。

3. 4℃离心，12000g×15min，取上清置另一1.5ml离心管中。

4. 加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min。

5. 4℃离心，12000g×10min，弃上清。

6. 加入1ml75％乙醇，轻轻洗涤沉淀。4℃离心，7500g×5min，弃上清。

7. 晾干，加入适量的DEPC H 2 O溶解（65℃促溶10～15min）。

8. 硼酸盐缓冲液快速电泳检测RNA完整性。