RNase-Free TE Buffer（无RNase的TE缓冲液），pH7.4技术服务

一、实验原理

类似于DNA的体内复制。首先待扩增DNA模板加热变性解链，随之将反应混合物冷却至某一温度，这一温度可使引物与它的靶序列发生退火，再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。RNase-Free TE Buffer（无RNase的TE缓冲液），pH7.4这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环，PCR就是在合适条件下的这种循环的不断重复。

二、实验步骤

PCR扩增

RNase-Free TE Buffer（无RNase的TE缓冲液），pH7.4根据客户的实验目的，进行PCR反应的优化。

1、变性：高温使双链DNA解离形成单链（94℃，30s）。

2、退火：低温下，引物与模板DNA互补区结合（55℃，30s）。

3、延伸：中温延伸。DNA聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应（70～72℃，30～60s）。

RNase-Free TE Buffer（无RNase的TE缓冲液），pH7.4以上述三个步骤为一个循环，每一循环的产物均可作为下一个循环的模板，经过n次循环后，目的DNA以2n的形式增加。

三、样品准备

1、模板制备

客户提供PCR所需模板（质粒、基因组DNA、PCR产物等），或者提供样品，我们制备模板。

2、引物设计

RNase-Free TE Buffer（无RNase的TE缓冲液），pH7.4客户提供上、下游引物，或者提供目的基因的相关信息（基因序列、Genebank accession number扩增产物的用途等），我公司提供免费的引物设计及合成。