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DNA提取 :一、Isoleucine Solution(异亮氨酸溶液),0.3%实验原理
DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,因此DNA的提取也是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作之一。我公司提供从各种不同来源的样品(如细菌、真菌、血液、培养细胞、动物组织及植物组织等)中提取高纯度基因组DNA的服务。
二、实验步骤
1、细胞裂解
● CTAB法 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)是一种阳离子去污剂,可融解细胞膜,并与核酸形成符合物。该复合物在高盐溶液中(>0.7M NaCl)是可溶的,Isoleucine Solution(异亮氨酸溶液),0.3%通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。此法多用于植物组织、真菌等材料。
● SDS法 SDS是一种阴离子去污剂,高温(55℃-65℃)下可裂解细胞,使蛋白变性、染色体解析。常用于血液、细菌、酵母、动物组织、细胞等样品基因组DNA的提取。
● 其他方法 物理方法如机械剪切、超声波破碎、匀浆等,化学方法如异硫氰酸胍、碱裂解、蛋白酶K消化等。
2、DNA分离纯化
● 用酚/氯仿抽提裂解液,收集水相,乙醇沉淀DNA,最后用TE溶解DNA沉淀。
3、DNA的定量及检测
● Isoleucine Solution(异亮氨酸溶液),0.3%琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段的分子质量。
● 紫外分光光度计检测DNA浓度 DNA在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50ug/ml双链DNA。提取的基因组DNA样品浓度=OD260×50ug/ml×稀释倍数。
● 紫外分光光度计检测DNA纯度
一般用OD260/OD280值检测DNA样品的纯度。OD260/OD280值约为1.7-1.9,说明DNA纯度较好;若小于1.7有可能有蛋白污染;若大于2.0,说明有RNA污染或DNA已经降解。
三、Isoleucine Solution(异亮氨酸溶液),0.3%样品处理
因细胞结构及所含成分不同,样品预处理的方法也有差异。不同样品的预处理方法大致如下:
● 植物组织——液氮研磨
● 动物组织——匀浆、液氮研磨
● 培养细胞——蛋白酶K消化
● 细 菌——溶菌酶消化
● 酵 母——Lyticase消化、玻璃珠破碎
Isoleucine Solution(异亮氨酸溶液),0.3%注意:客户最好提供新鲜的样品或取样后立即在低温(-20℃或-70℃)冷冻保存的样品,避免反复冻溶。
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