咱们在运用ELISA试剂盒96孔板的试验测定的时分，常发现有“边缘效应"，也就是外周孔显色较基地孔深。经研究证真实温育中的热力学梯度也许是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在试验室的常规ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃摆布）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与基地孔之间也许存在一热力学梯度。因而运用水浴或在将反响溶液参加至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地扫除“边缘效应"，而且可进步测定的重复性。 
ELISA试剂盒还有就是在试验中，必定有运用微量加样器参加样本的步骤。提示留意：加样不行太快，要防止加在孔壁上部，不行溅出和发生气泡。ELISA试剂盒太快的话无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易致使非特异吸附。溅出会对附近孔发生污染。出现气泡则反响液界面有区别。所以，有时分一份标本用一样的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，通常就是上述加样及试剂的过错所造成的。