上清液

离心去掉细胞

CQK30S

磷酸调pH3.8

乙酸铵洗脱

上样量<50g/L

结晶

酶转化

GH C8反相

 

结晶

甘精胰岛素成品（纯度>99%）

GH C8(120孔径,10um粒径)柱子，10%乙腈-0.25M乙酸平衡，酶转化液1:5水稀释后上样，乙腈梯度洗脱，得到纯度94.5%的产品；上述样品稀释后，再上GH C8（同前），平衡液液为乙腈-0.2M乙酸钠（pH5.0），乙腈梯度洗脱，得到纯度为98.5%产品；上述样品1:3水稀释后，上GH C8（同前），平衡液为乙醇-0.05M乙酸，乙醇梯度洗脱，得到纯度为99%的甘精胰岛素纯品

 

洗脱液加入0.5%的Phenol，4%的ZnCl₂，NaOH调节pH为4.08，缓慢搅拌15min，转移到2-8度环境过夜，离心收集沉淀

 

上步得到的样品加入柠檬酸、ZnCl₂和调节pH得到结晶沉淀，冷水冲洗该沉淀物