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甲苯胺蓝-DNA琼脂
(Toluidine Blue-DNA Agar)
用 途:
用于金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶的试验。 (SN 0172-92)。
原 理:
具有脱氧核糖核酸酶的细菌分解培养基中的脱氧核糖核酸(DNA),使DNA长链水解成数个单核苷酸的寡核苷酸短链,使指示剂甲苯胺蓝作用变成粉红色;氯化钙提供阳离子作为激活剂;氯化钠维持均衡的渗透压;三羟甲基氨基甲烷为缓冲剂;琼脂为培养基的凝固剂。
配方(每升):
脱氧核糖核酸(DNA) |
0.3g |
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氯化钙 |
0.0011g |
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氯化钠 |
10g |
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甲苯胺蓝 |
0.083g |
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三羟甲基氨基甲烷 |
6.1g |
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琼脂 |
10g |
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最终pH 9.0±0.2 |
使用方法:
1. 称取本品26.5g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,115℃高压灭菌15min(即用可不需灭菌),备用。
2. 载玻片的制备:取3mL甲苯胺蓝-DNA琼脂平铺于在载波片上制成标本,待琼脂凝固后,在琼脂上打成直径2mm的小洞(每个载玻片10-12个),抽出小洞中的琼脂块。
3. 从Baird-parker平板挑一个可疑单菌落接种普通肉汤培养基中,36±1℃培养20h~24h后,经过100℃沸水煮15min,取0.01mL接种所制备的载玻片上小洞,于35℃培养4h后,观察结果。
质量控制:
质控菌株接种后,于35℃培养4h结果如下:
菌 名 |
菌 号 |
培养特征 |
金黄色葡萄球菌 |
ATCC6538 |
粉红色圈 |
表皮葡萄球菌 |
CMCC(B)26069 |
无粉红色圈 |
贮 存:2~8℃避光贮存
贮 存 期:三年
规 格:100g