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T4 DNA Ligase
T4噬菌体DNA连接酶
说明：T4噬菌体DNA连接酶主要催化两条DNA链上相邻的5’磷
酸基和3’-羟基之间形成磷酸二酯键。它的主要用途是连接
带匹配粘端的DNA分子，或使平端的双链DNA分子互相连接
或与合成接头相连接。也可催化DNA与RNA之间以及少数
RNA之间的连接，但不能催化单链DNA之间的连接。
单位定义：0.01Weiss单位的T4 DNA连接酶可以在16℃下反应
20分钟，连接95％的1μgλDNA-HindⅢ的分解物。
注意：一个Weiss单位的T4 DNA连接酶相当于核酸外切酶测定
中的0.2单位或60个粘性末端（New England Biolabs）
存储缓冲液：10mM Tris-HCl（pH7.5 25℃）,50mM KCl，
1mM DTT，0.1mM EDTA和50％glycerol。
10×反应缓冲液：300mM Tris-HCl（pH7.8 25℃）,
100mM MgCl2，100mM DTT，10mM ATP
质量控制：
1 活性：大于3Weiss单位/微升。
2 蓝白克隆鉴定：12Weiss单位T4 DNA连接酶与3μg经内
切酶酶切产生的5’或3’粘性末端DNA在4℃下，反应16
小时后转化到大肠杆菌JM109培养，白色菌落小于总菌落
数的2％；12 Weiss单位T4 DNA连接酶与3μg经内切酶酶
切产生的钝性末端DNA在4℃下，反应16小时后转化到大
肠杆菌JM109培养，白色菌落小于总菌落数的5％。
3 核酸内切酶测定：20Weiss单位酶与1μg超螺旋质粒
DNA在37℃下反应16小时，DNA的电泳图谱不发生变化。
4 单链和双链DNase测定：20Weiss单位酶与50ng同位素
标记的单链或双链DNA反应16小时，单链DNA的释放量
小于2％；双链DNA的释放量小于1％。
5 RNase测定：37℃时，20Weiss单位酶与50ng 3H-RNA
保温5小时，释放量小于1％。
6 蛋白纯度：SDS PAGE 检测纯度≥90％。
储存条件：−20℃
From Promega M1801S