李斯特菌检测试剂盒 Reveal

Reveal李斯特菌检测系统

储存条件：2-8℃，切勿冷藏。

AOAC-RI许可号码：960701

主要用途

Reveal李斯特菌检测系统可用于快速鉴定食品及环境样品中李斯特菌，完成对李斯特菌的检测和初步鉴别只需要43小时。

主要使用者

Reveal李斯特菌测试系统旨为熟悉李斯特菌分离与鉴定中无菌操作技术的人员而设计的。建议不具备微生物基础知识的使用者参加Neogen公司的技能培训。

测试原理

该系统利用Half Fraser Broth Plus和缓冲李斯特菌富集培养液（BLEB），对存在于食品及环境样品中李斯特菌选择性培养。使用Reveal检测装置，42小时培养对于李斯特菌鞭毛表达及检测能够达到最好效果。

将部分二次富集培养物（135μl）滴加到Reveal 检测卡的样品孔内，样品通过毛细管作用渗过含李斯特菌特异性抗体（与蓝色乳胶粒子相偶联）的试剂区。如果样品中存在李斯特菌抗原，它将与蓝色乳胶标记的抗体结合。该抗原-抗体复合物离开试剂区，经过含有李斯特菌抗体（分布呈带状）的硝化纤维膜。该含蓝色乳胶免疫复合物被捕获并聚集在这个区域，从而显示一条可见的线。剩余的样品继续迁移而进入位于膜末端的废液贮存处。

试剂区也含有针对广谱抗原的蓝色乳胶复合物（指示剂），无论李斯特菌存在与否，它都会被样品溶液释放。蓝色乳胶复合物对照指示剂通过膜迁移到阴性对照捕获区（含针对广谱抗原的抗体区），捕获并集结成一条可见线。无论李斯特菌抗原存在与否，都会在对照区形成对照线，以保证检测过程操作正确无误。

培养注意事项

除了下述的富集方法制备的样品外，Reveal李斯特菌能还适用于其它培养方法制备的样品中李斯特菌的检测。请与Neogen联系以获得更多有关的信息。

产品规格

灵敏度

Reveal李斯特菌快速检测已经在很多种类食品上经过评估，从二次富集培养基中进行Oxford琼脂分离培养，检测装置与之比较，在超过1000个检测中，其相关性大于99%

特异性

检测装置内抗体与下列系列微生物进行交叉反应试验，在最低检测水平为1×10⁸ml下无任何交叉反应。

Acinetobacter anitratus Bacillus subtilis Escherichia coli

Aerococcus viridand Citrobacter diversus Hafnia alvei

Arizona spp Citrobacter koseri Klebsiella pneumoniae

Bacillus cereus Edwardsiella tarda Proteus stuartii

Bacillus circulans Enterobacter aerogenes Salmonella spp

Bacillus licheniforis Enterobacter cloacae Staphylococcus aureus

Bacillus macerans Enterococcus faecalia Streptococcus faecalis

提供的材料

Reveal检测试剂盒

20个单独包装的李斯特菌检测装置

20个移液管

前增菌试剂盒

20瓶Half Fraser Broth Plus

20个无菌袋

量杯

二次增菌试剂盒

20瓶缓冲李斯特菌肉汤（BLEB）

试剂盒不提供的必需品

能维持30±2^oC的培养箱

能维持80±2^oC的水浴或加热块

容量5-8ml的玻璃试管

无菌水

能移取10ml的移液器

能移取100-135ul的移液器（或Neogen球形移液器）

储藏

不用时，检测装置应储存于2-8℃；干粉培养基本储存在室温下（15-30℃）。

警惕

1 不要对Half Fraser Broth Plus高压灭菌

2不要使用过期的培养基

3 打开小袋前，让检测装置温度升至室温

4 水化前增菌及二次增菌干粉培养基后同一天使用

5 培养时间和温度尤为重要，否则会导致错误结果

6 在培养过程中样品袋不能扎得过紧，以便于空气交换；这对李斯特菌生长及抗原表达至关重要

7检测应在培养后的8小时内完成

8 适当采用良好微生物实验室操作规程

不同样品检测

该系统对食品及环境样品中李斯特菌检测非常有效，请联系Neogen销售代表来获得其它资料。

1 样品准备及培养- 培养袋或手工方法

1 将1瓶Half Fraser Broth Plus培养基倒入无菌袋中，使用提供的量杯加入225ml无菌水，抓牢袋子离顶部2-3英寸处并用力混匀，直到溶解。

2 将25g样品（或取样棉球）加到含有Half Fraser Broth Plus培养基的无菌袋中，抓紧袋子顶部，“捏”样品直到混匀，用一边到另一边的方式剧烈晃动袋子。

参考办法：将袋子放到摇床内，用正常速度下混匀2分钟。

3 松散地紧闭袋子，30℃下温育至少21小时，但不要超过24小时。

4 预先从温箱中取出袋子，加入10ml无菌水来水化一瓶BLEB培养基，拧紧瓶盖且摇动瓶子使培养基溶解。

5 从无菌袋中取出0.1ml（4滴）培养液到水化了的BLEB培养基内。

6 松开BLEB瓶盖，30℃下温育另外21小时，但不要超过24小时。

2 用Reveal装置检测

A 准备

1 从培养箱中小心取出BLEB样品瓶，不要打乱任何食品碎片，从培养液上层取出2ml到一个小玻璃试管内

2 将玻璃试管放置在80℃水浴或加热块内20分钟

3 冷却至室温

B Reveal装置检测步骤

1 从冷藏条件下取出必要数量的Reveal检测装置，使用之前回复至室温（25℃）

2 打开锡箔袋，取出检测装置并放置于平面上，并为检测装置做上标记。

3用塑料移液器取样品

警告：不要旋涡、搅拌或摇动样品

不要搅动样品底部的颗粒

只移取液体样品

4 将移液器垂直于检测装置的样品孔上方，滴加6滴到样品孔中。

参考方法：使用一个定量移液器加入135ul样品到样品空内。

5 20分钟内观察并记录检测结果。由于过度显色，20分钟后观察的结果是不准确的。

结果的解释

检测窗口出现一条蓝线指示在BLEB中存在李斯特菌鞭毛抗原，这是阳性结果；质控窗口出现一条蓝线指示该装置工作正常。

检测和质控窗口内蓝线强度的差异不会影响结果的解释，检测窗口内很强的蓝线而质控窗口没有线，表明有过多的鞭毛抗原，该结果极少见（有代表性的为少于1%）。如果对已经完成测试的验证是必要的，用一个稀释步骤来对样品重新检测，热的浸出物应该用新的BLEB稀释1到10倍，用另外检测装置测试。

如果20分钟内在检测或质控窗口内没有出现任何线，用另一个检测装置对同一培养浸出物进行检测，规定不要超过1小时。

确认

本公司建议，用Reveal富集培养鉴定为阳性的样品应该用涂布平板法确认。方法是将样品培养物涂布于BAM或FSIS平板上进行，平板的选择取决于样品的种类。

说明：用BAM或FSIS方法检测一个“复制”的“亚样品”的结果并不一定与Reveal检测的结果一致！细菌并不是均匀的分布于样品中（对于固体或干的样品更是如此），因此，复制的亚样品可能不含有李斯特菌。

局限性

如果提取抗体的数量小于检测的最低灵敏度，或者温育温度高于30℃，会出现阴性结果；

用该方法对浓缩的酵母材料检测时可能得到假阴性结果，可以通过延长前增菌和二次增菌到24-26小时的温育时间来改进。