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产品特点
■ 热稳定性:94℃ 保持120 min 后仍具有50% 的活性;
■ 合成能力:催化5’ → 3’ DNA 合成,通过优化PCR 条件,以λ DNA 为模板最高可扩增10 kb DNA 条带;在配套的5×GC Buffer Ⅰ或 5×GC Buffer Ⅱ的协助下,Platinum HiProof Taq( HiGC & HiYield ) 能有效催化GC 含量高达85% 的DNA 模板的扩增;
■ 外切核酸活性:具备很高的3’ → 5’ 外切核酸(校正)活性,无可检测水平5’ → 3’ 核酸外切酶活性;
■ 高保真性:源自其3’ → 5’ 外切核酸(校正)活性以及特殊的增强肽段,该酶具有极高保真度,大约是普通Taq DNA Polymerase 的15 倍;
■dUTP、dITP 及包含这两种核苷酸的引物不能用于Platinum HiProof Taq ( HiGC & HiYield ) 参与的PCR。
■ 高扩增速度:扩增片段长度< 2 kb,Platinum HiProof Taq( HiGC & HiYield ) 的延伸速度为2 kb/min;> 2 kb 的片段,其延伸速度为0.5-1 kb/min。
应用
普通PCR、高保真PCR、复杂DNA 片段PCR、高GC含量模板PCR、平末端载体构建PCR、菌落PCR、定点突变PCR。
质量控制
■ 内切核酸酶检测:无可检测水平的内切核酸酶污染;
■ 热稳定性:37℃保持21 天酶活性无明显降低。
浓度
2 U/μL,100 U/管
来源
E.coli 表达重组Pyrococcus furiosus DNA 聚合酶基因。
储存条件
保存(运输)温度:-20℃
活性单位定义
1 个活性单位定义为70℃反应30 min,将10 nmol dNTPs合成多聚核苷酸(吸附于吸附柱DE-81)所需的酶量。
酶活性分析混合物:67 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 6.7 mM MgCl2, 1 mM 2-
巯基乙醇, 50 mM NaCl, 0.1 mg/mL BSA, 0.75 mM 活化鲑精DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/mL [3H]-dTTP。
抑制和失活
■ 低浓度尿素、甲酰胺、二甲基甲酰胺和DMSO 对Platinum HiProof Taq ( HiGC & HiYield ) 酶活性无明显抑制作用;
■ 离子型去污剂脱氧胆酸钠(>0.06%)、十二烷基肌氨酸钠(>0.02%)、SDS(>0.01%), 非离子型去污剂Tween20(>5%)、 Nonidet-P40 (>5%)、 Triton X-100 (>5% ) 对Platinum HiProof Taq ( HiGC & HiYield ) 酶活性具有抑制效果;
■ 酚/ 氯仿抽提可使Platinum HiProof Taq ( HiGC & HiYield ) 失活。
储存缓冲液
Storage Buffer
50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 0.1 mM EDTA,1 mM
dTT, 0.5%(v/v) Nonidet-P40, 0.5%(v/v) Tween-20, 50%(v/v)
Glycerol。
10×Platinum HiProof Taq PCR Buffer ( without Mg2+)
200 mM Tris-HCl (pH 8.8), 100 mM (NH4)2SO4, 100 mM KCl,
1 mg/mL BSA, 1% (v/v) TritonX-100。
- 询价产品:Platinum HiProof Taq ( HiGC & HiYield ) 100U
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