HiProof Taq ( HiGC ) 250U

HiProof Taq ( HiGC ) 是来源于嗜热细菌Pyrococcus furiosus 的高耐热性DNA 聚合酶。该聚合酶具备5’ → 3’ DNA聚合活性和3’ → 5’ 核酸外切活性，催化DNA 合成的错配率为2×10^-6 errors per nt per cycle，具有优异的保真性能。HiProof Taq ( HiGC ) 不具备末端脱氧核苷酸转移酶活性，PCR 产物3’端为平末端。

产品货号：

CED0021

产品规格：

250U

产品特点
■ 热稳定性：94℃保持120 min 仍具有50% 的活性；
■ 持续合成能力：催化5’ → 3’ DNA 合成，通过优化PCR 条件，以λ DNA 为模板最大可扩增10 kb DNA 条带；持续合成能力较一般Pfu 酶高。此外，配合使用 GC Buffer（Cyagen），可催化GC 含量高达85% 的人基因组PCR；
■ 核酸外切活性：具有3’ → 5’ 核酸外切（校正）活性，无可检测水平的 5’ → 3’ 核酸外切（水解）活性；
■ 高保真性：错配率为2×10^-6 errors per nt per cycle，其保真度是普通Taq DNA Polymerase 的10 倍以上；
■ dUTP、dITP 及包含这两种核苷酸的引物不能用于HiProof Taq ( HiGC ) 参与的PCR。
■ 延伸速度：片段长度＜ 2 kb，其延伸速度为2 kb/min，与Standard Taq 速度相近；片段长度＞ 2 kb，其延伸速度为0.5-1 kb/min。

应用
普通PCR、平末端产物PCR、高保真PCR、菌落PCR、定点突变PCR、基因多样性分析。
质量控制
■ 内切核酸酶检测：无可检测水平的内切核酸酶污染；
■ 热稳定性：37℃保持21 天酶活性无明显降低。

浓度
2 U/μL，250 U/管

来源
E.coli 表达重组Pyrococcus furiosus DNA 聚合酶基因。

储存条件
保存（运输）温度：-20℃

活性单位定义
1 个活性单位定义为70℃反应30 min，将10 nmol dNTPs合成多聚核苷酸（吸附于吸附柱DE-81）所需的酶量。
酶活性分析混合物：67 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 6.7 mM MgCl₂, 1 mM 2-巯基乙醇, 50 mM NaCl, 0.1 mg/mL BSA, 0.75 mM 活化鲑精DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [³H]-dTTP。

抑制和失活
■ 低浓度尿素、甲酰胺、二甲基甲酰胺和DMSO 对HiProof Taq( HiGC ) 活性无明显抑制作用；
■ 离子型去污剂脱氧胆酸钠(>0.06%)、十二烷基肌氨酸钠(>0.02%）、SDS(>0.01%)，非离子型去污剂Tween20(>5%)、Nonidet P40(>5%)、TritonX-100(>5%) 对HiProof Taq ( HiGC )活性具有抑制效果；
■ 酚/ 氯仿抽提可使HiProof Taq ( HiGC ) 失活。

储存缓冲液
Storage Buffer
50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dTT, 0.5%(v/v) Nonidet P40, 0.5%(v/v) Tween20, 50%(v/v)Glycerol。
10×HiProof Taq PCR Buffer (without Mg²⁺)
200 mM Tris-HCl (pH 8.8), 100 mM (NH₄)₂SO₄, 100 mM KCl, 1mg/mL BSA, 1%(v/v) TritonX-100。