本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的AMOZ，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的AMOZ和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃它酮代谢物的衍生物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的AMOZ含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出呋喃它酮代谢物含量。

 

试剂盒灵敏度：  0.1 ppb

组织、蜂蜜         0.2 ppb

鱼/虾等水产品组织因存在一定的干扰，检测下限为0.3 ppb

鱼/虾水产组织       90%±15%

蜂蜜/鸡肉/肝脏样本  80%±15%

呋喃它酮代谢物      100%

呋喃唑酮代谢物     ﹤0.1%

呋喃妥因代谢物     ﹤0.1%

呋喃西林代谢物     ﹤0.1%

 

1．微量测试孔：96T/8孔

2．标准品液： 0 ppb  0.1 ppb  0.3 ppb  0.9 ppb  2.7 ppb  8.1 ppb （1ml/瓶）

3．酶标记物                12ml

4．抗体工作液              7ml

5．底物缓冲液              7 ml

6．底物液                  7 ml

7．终止液                  7 ml

8．20倍浓缩洗涤液         50 ml

9．复溶液                  50 ml

10．15.1 mg衍生化试剂

 

具备的仪器：  微孔酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）

微量移液器：  单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道250µl

试       剂：  甲醇、氢氧化钠、乙酸乙酯、正己烷、浓HCl、磷酸氢二钾、邻硝基苯甲醛、亚硝基铁氰化钾（K₂Fe（CN）₅·NO·3H₂O）ZnSO₄·7H₂O

 

处理任何样本时，都必须注意：

（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。

（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。

1．衍生化试剂 称15.1 mg邻硝基苯甲醛加甲醇10 mL溶解(浓度10 mM)

2．C液：（供奶样用）称12.5 g亚硝基铁氰化钾用去离子水定溶至100 mL。

      D液：（供奶样用）称29.8 g 硫酸锌用去离子水溶解定溶至100 mL。

3．0.1 M K₂HPO₄ 称22.8 g K₂HPO₄·3H₂O

加去离子水溶解定溶至1 L

4．1M HCl取8.6 ml浓HCl加水定溶至100 mL。

5．1M NaOH称取4 g NaOH加水定溶至100 mL。

用均质器均质样本，接（d）的描述方法

1. 取出5 mL的奶样本到玻璃离心管中，分别加入C液和D液各250 µL。

2. 用振荡器充分混合样本,用恒温离心机4000 r/min以上离心10 min(4-12 ℃).若没有恒温离心机,则先将样本降温至大约8 ℃，然后离心。

3. 接(d)的描述方法

1. 取1±0.05 g样本到离心管中。

2. 加入4 mL的去离子水溶解，再加入0.5 mL 1 M HCl和100 µL衍生化试剂,充分振荡。

3. 接(d)第2步描述方法

1. 取1±0.05 g的均质样本(肉样/鱼虾)、牛奶的离心上清液1.1 mL（相当1 mL奶样），分别加入4 mL的去离子水，0.5 mL 1 M HCl和100 µL衍生化试剂，充分振荡。

2. 置于56 ℃环境中孵育（2 h）。

3. 分别加入5 mL 0.1 M K2HPO4， 0.4 mL1 M NaOH和5 mL的乙酸乙酯，充分振荡30 s。

4. 在室温下（20-25 ℃）4000 r/min以上离心10 min。

5. 取出2.5 mL的乙酸乙酯到另一洁净容器中于50 ℃氮气/空气吹干。

    6. 用1 mL正己烷溶解干燥物，用1mL已稀释好的复溶液充分混合；在室温下（20-25 ℃）4000 r/min以上离心10 min。

7. 取50µl下层相用于分析。

样本稀释倍数：2

 

1． 将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温（20-25 ℃）平衡30 min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2． 按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷冻。

3． 加标准品/样本50 µL /孔，然后加入抗体工作液50 µL/孔，再振荡混匀，用封板膜盖板，室温反应30 min。

4． 洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。

5． 加入酶标记物100 µL/孔，用封板膜盖板，室温反应20 min。

6． 洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。

   7．显色：每孔加入底物缓冲液50µl，再加底物液50µl，轻轻振荡混匀，室温环境下避光显色10min。

8．测定：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡匀，设定酶标仪于450nm处（在20min内读完数据），测定吸光度值。

 

以标准品百分吸光率为纵坐标，以AMOZ标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中AMOZ实际浓度。

 

1．室温低于20 ℃或试剂及样本没有回到室温（20-25 ℃）会导致所有标准的OD值偏低。

2．洗板拍干后应立即进行下一步操作。

3．混合要均匀，洗板要彻底，否则会出现重复性不好的现象。

4．反应终止液为2 M硫酸，避免接触皮肤。

5．将不用的微孔板放进自封袋重新密封; 标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

6．不要使用过了有效日期的试剂盒，不要使用不同批号试剂盒中的试剂。

7．显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之，0标准的吸光度值小于0.6时，表示试剂可能变质。

8．该试剂盒最佳反应温度为25 ℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

 

储藏条件：试剂盒于2-8 ℃保存，不要冷冻。

保质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒