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Mitochondria Isolation Kit for Cell and Tissue 组织/细胞线粒体分离试剂盒
产品信息
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
价格(元) |
FS1012-50T |
Mitochondria Isolation Kit for Cell and Tissue组织/细胞线粒体分离试剂盒 |
50T |
450 |
FS1012-100T |
Mitochondria Isolation Kit for Cell and Tissue组织/细胞线粒体分离试剂盒 |
100T |
765 |
冰袋运输。-20℃保存,有效期1年。
使用方法
1)样本处理
①组织匀浆:称取100-200 mg新鲜组织,PBS或生理盐水冲洗干净,滤纸吸干,用剪刀剪成非常小的碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1-2.5mL冰预冷的试剂A,0℃冰浴研磨30-40次。
②培养细胞匀浆:消化细胞,PBS洗涤,800 g 离心5-10 min收集细胞。计数,每次提取需要1-5 × 107个细胞,加入1-2.5mL预冷的试剂A,重悬细胞,混匀,将细胞悬液转移到小容量的玻璃匀浆器,0℃冰浴研磨30-40次
2)将组织或细胞匀浆物转移到离心管,4 ºC,1000 g 离心5 min。【注】:细胞核、大的膜碎片、未裂解细胞等沉淀在管底。
3)收集上清液并转移到新的离心管。4 ºC,1000 g 再次离心5 min。弃沉淀。
4)将上清液转移到新的离心管。4 ºC,12,000 × g 离心10 min,离心后的上清含胞浆成分,可提取胞浆细胞,小心去除上清,沉淀即为分离得到的细胞线粒体。【注】:离心后的上清含胞浆成分,尽量除去上清。
5)往线粒体沉淀中加0.5ML试剂B重悬线粒体沉淀,4℃,1000g离心5min。
6)取上清,转移至新的离心管中,4℃12,000g离心10min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管底。
7)用50-100UL试剂C或者合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀,立即使用或者-70℃保存
注意事项:
1. 为保证获得完整的线粒体,务必做到:全程低温操作;快速;在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞,这是制备线粒体的最关键环节。与组织块相比,培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁,因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2. 以离心力g计算正确的离心速度,不同的离心机可据此精que计算离心速度。3. 进行Western Blot和2D-胶电泳,可直接加入上样缓冲液裂解线粒体。 转速与离心力换算: G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2 G为离心力,一般以g(重力加速度)的倍数来表示; [rpm]2即:转速的平方; R为半径,单位为厘米。
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- 询价产品:Mitochondria Isolation Kit for Cell and Tissue 组织/细胞线粒体分离试剂盒 FS1012
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