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许多应用(如光遗传学、光激活、光刺激等)需要精确的空间、时间和光谱控制方面的要 求。例如,对于光遗传学来说,为了研究神经元以及它们的回路特性,就需要通过精确传输不 同颜色、高时空分辨率的光,来刺激/抑制所选择的神经元。除此之外,还可能需要单独或同时 控制不同位置的神经元活动。Mightex的动态空间照明器(DSI)就是专为这种应用而设计的。
Polygon400 DSI集成了当今最先进的光空间调制器和高功率LED,该LED拥有独特的集光 率保持技术能传递高强度的带有衍射极限分辨率的照明图案。还采用了德州仪器公司(Texas Instruments)的DLP光空间调制器来显示用户定义的图案。在Polygon400内部是一个独特的光学系统,该系统把来自LED光源的光传递到DLP平台然后又通过显微镜到达样本平面。这种系 统化的设计能使得在保持衍射极限图像性能的前提下达到最大的光强度。
时间性能对许多使用Polygon400的应用来说是一个关键因素。在超过4,000 fps的刷新率 和快速切换LED的情况下, Mightex的Polygon400仍能够以微秒级的精度来传递照明图案。
用 户 可 以 使用专用软件来 生成照明图案, 同时也可以控制 照 明 强 度 和 时间。该软件也可 以把照明图案与 显微镜上的数码 相机所拍摄的图 像进行对准。
MightexPolygon400的设计使之容易能插入到显微镜的无限远路径。对倒立式显微镜来说,最好的插入点是在显微镜的后侧端口,那里通常是摆放萤光样品的地方。还需要一个滤光片用以把Polygon400光路折射进显微镜。用于萤光观测用的滤光片能很 好地起到作用。对正立式显微镜来说,我们提供一个光束结合器插入到双筒/三筒镜的下面。 位于光束结合器中的二向性滤光片或者镜子把Polygon400光束传递到显微镜的光路中。
特点
• 可定义图像定式
• 最高达4000 帧/秒
• 416K 像素DLP平台
• 可选波长范围宽
• 支持LED或弧光灯
• 有限衍射投射
• 高通量保持扩展性设计
• 用于波长快速切换的外部LED
控制器
• 可光纤或光导输入
• 直观的软件操控照明定式的空
间性、时间性和光谱
应用
• 光生物学
• 萤光成像
• 激光聚焦显微镜
选用“I”型Polygon400i时,用户可以从400nm到700nm的范围内指定最多三个LED作为内置光源。
“E”型的Polygon400不使用内部LED控制器,用户可通过外部LED控制器直接控制内部的LED。 内部LED的正负极连到Polygon400后面的多针接头上。
光导耦合“G”型(Polygon400g)也可以使用外部光源如LED、激光和弧汞灯。光导耦合型没有内置LED。
Polygon400g接受基本的3mm芯径、套圈外径5mm和套圈长度15mm以上的光导。
“F”型Polygon400f与“G”型类似,除了它使用光纤而不是光导作为输入之外,其它都是一样的。“F”型有一 个标准的SMA接头,为大多数激光光源所使用。
外部LED控制器可以提供内部LED控制器不能支持的多种功能。可以有更广的动态范围,更高的强度分辨率(>10
位),脉冲模式下更高的峰值电流以及更快的响应时间(<10ns)。 使用外部LED控制器还能单独控制LED的照明时间而不受控于微镜阵列。例如,当微镜处于一个特定的位置时,LED可
以被调制成所需的强度特性。另外,还可以通过Polygon400提供的外部触发信号,达到LED和微镜之间的同步要求。
Mightex提供多种LED控制器可用于Polygon400的“E”、“G”和“F”型号。Polygon400的软件也 包含了同步性能以支持BLS系列LED控制器。对第三方LED控制器而言,可通过触发信号或Polygon400的SDK来实现同 步功能。
还可以使用其它端口比如显微镜上的照相机端口来使用Polygon400照明。如果您有特殊的需求,请发邮件到
amoytech@163.com /alinry_luo@163.com 或致电 。
用户应用实例
1. 在被感染的海马神经元上面,用Mightex的Polygon400对紫红质通道蛋白做光遗传学刺激。
A)图中蓝线所示为在用Polygon400发出的蓝光激活紫红质通道蛋白时,使用膜片钳技术记录所产 生的电流。
B)活动电极(上扫描线)的激活和在电压钳状态下的相关电流(下扫描线)活动电极可由Polygon发出的蓝色光激发(0.5ms激发电流,激发光强度60%)
(Courtesy Dr. Hans van Hooft, University of Amsterdam )
2. 使用Mightex的Polygon400于光遗传学刺激(神经元的)突触
在一转基因老鼠的氨基丁酸能神经元的光敏感通道中记录得到的光诱发的抑制性后突触电流
(IPSC)。
后突触细胞是非氨基丁酸能(负光敏感通道)的,蓝光刺激氨基丁酸能传入光敏感通道。
蓝线表示蓝光照射的时间由Polygon发出的光斑1诱发了IPSC(抑制性后突触电流),而光斑2没有产生反应。
(Courtesy Dr. Wataru Inoue, University of Western Ontario, Canada)
3. 盖玻片上由光调节所产生的对蛋白质之间相互作用的影响
http://www.mightexsystems.com/family_info.php? cPath=287_245_243&categories_id=243
这段视频显示了蛋白质之间的相互作用被蓝光所抑制的效果。
一部分是通过生物素表面试剂附着在盖玻片上,而标有“mCherry”的另一部分, 被固定在盖玻片的暗处。Polygon400的图案照明导致了标有“mCherry”的蛋白质部分 的可逆转分解,并且在关闭蓝光照射之后的几分钟之内又重新结合起来。 Wittmann实验室正致力于研究开发能用光照控制的细胞粘合表面技术。
(Courtesy Dr. Torsten Wittmann, University of California San Francisco)
4. 用Polygon急剧刺激来自于齿状回中的转基因光敏感通道的老鼠海马切片
第一个图是用一个不断增大的圆型图案进行反复刺激并导致不断增强的 反应,直到一个反应电压产生为止。
第二个图是从30%到100%增加刺激的强度,并保持图案尺寸不变。在 这里我们以10Hz100%强度驱动细胞,可以看到在每一次去极后,刺激可以 足够来驱动激发电极两次。
(Courtesy Dr. Geoffrey G. Murphy, Molecular & Behavioral Neuroscience Institute, Department of Molecular & Integrative Physiology, University of Michigan. Recordings made by Dr. Shannon Moore.)
5. 使用Polygon400对光敏感通道的光刺激
A)来自YFP光敏感通道老鼠的大脑切片,表明了在锥形神经元的皮层L中的 反应。
B)由填满Alexa594的来自躯体感觉皮质的L5锥状神经元允许产生神经元隔 间的视觉,而不用刺激光敏通道。 蓝点显示了在照明区域(蓝LED470nm)的尖端树突。标记区域的扩大表 示刺激了精致的树突。
C)来自体细胞的电生理电流记录(膜片钳),与由蓝光刺激的光敏感通道 一致。扫描线下面的数字与B中显示的刺激点数字相关。
6. 用Polygon400在海马神经元的光敏通道中的光映射去极化处理
利用CamKII-ChR2-GFP慢性病毒转变成E18斯普拉格-杜勒鼠神经 元。躯体行为经由全细胞膜片钳技术记录。每个区域由Polygon400以 100%功率和20ms曝光时间照射。洋红图案的强度代表用Polygon400的470nm刺激之前的即时静态电位的去极处理。在这幅图中,绿色代表 GFP信号的强度,黑色表示由膜片吸管回填的AlexaFluor594荧光强度。
(Courtesy Dr. Jacob T. Robinson, Departments of ECE and BioE, Rice Univer- sity, Houston, Texas. Data collected and prepared by Dan Murphy, Joel Dapello and
Ben Avants.)
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