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细胞培养用GIBCO血清
2013/2/17 10:58:23
浏览：3223
有关血清的基本信息
40年来,研究者依赖Invitrogen公司GIBCO血清在体外再造适于细胞生长,繁殖和分化的生理环境.在提供细胞培养基,平衡盐溶液和培养用试剂的同时,GIBCO提供高品质的血清.GIBCO自1961年开始生产用于细胞培养的动物血清,是此行业的开创者.在三十多年的岁月里,一直保持在技术和品质方面的领先水平,血清和培养基的市场占有率常年蝉联全球第一.
产品特点： GIBCO血清 。是上海拜力生物公司代理拳头产品。提供各位老师、经销商 GIBCO血清 的咨询、报价及技术服务，欢迎来电021-33779008。
GIBCO血清生产的纵向整体化管理
从血液收集到最终产品检验和内部稽核的每一个步骤,GIBCO都采用专用设备和标准操作程序,这种严格的控制可保证产品的高品质和最低的批间差.
可追踪性:血清品质的证据
GIBCO收集并保留从采血,处理,检测到发运的全部文件供追踪之用.
采 血
胎牛血清采用心脏穿刺的方法采血.马血清采自供体动物.新生牛血清采自出生10至14天的小牛.全部按照工业标准采血.
处 理
全部血清:收集的血液均在冷藏条件下处理.血清和凝块分离后立即将血清合并并冷冻.只有符合我们的检测标准的血清才被接受作进一步处理.
热灭活血清:热灭活是在56℃水浴中严格控温30分钟.
超低IgG胎牛血清:我们持有从血清中通过层析方法去除γ球蛋白的专利.经过这种程序处理的血清只有极低的IgG浓度(小于5 g/ml)但保持了血清的全部生物学活性.
透析血清:用12,000～14,000截留分子量的透析膜对0.15M的NaCl进行透析直到葡萄糖水平低于5mg/dl(用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶方法检测).为防止沉淀和血清中多肽的灭活,不进行过度的透析,因此一些小分子量的可透析成分如氨基酸不一定完全去除.
γ 射线照射血清:可按客户要求对血清进行γ射线照射.通过γ射线照射以灭活各种动物血清中的病毒和支原体的方法已经得到证实.研究证实照射剂量在30-45kGy为宜.这一数据符合最新的欧洲和美国FDA的标准,证实血清被照射后物理化学特性和细胞培养表现没有改变.
装 瓶
粗血清须通过一系列的过滤才成为成品.最后的过滤步骤包括0.2微米和0.1微米的无菌过滤.胎牛血清须通过三次100纳米过滤.
GIBCO的血清是在符合工业无菌标准1000级的严格操作条件下完成的.最高的无菌标准为1000000级,在没有终端灭菌的条件下是难以实现的.控制无菌状态的关键在于对所有与产品接触的材料的有效的灭菌程序,综合性环境监测程序,对最终过滤的整体检测程序等.此外,在正压条件下进行过滤和分装,HEPA过滤,环境控制等也是重要因素.
血清的包装采用GIBCO的E-Z HOLD 塑料瓶.在监测下进行灌装,标贴,并放置在-5～-20℃的储存温度下.直到质控报告完成,血清的品质被证实符合我们的标准后方可出厂.
有效期限
请参阅产品标签.
血清匹配和保留服务
由于采用严格的生产流程而使得GIBCO血清的批间差降至最低.但由于动物来源不同而导致的生物化学性质的差异也是不可避免的.GIBCO提供两种免费的方式以减小这种微小差异给您的研究带来的影响.
血清匹配程序:这一程序可以保证您所收到的血清具有您所要求的特性和培养表现.您只需简单地告诉我们您的要求,我们将向您提供与您的需求相匹配的某一批号血清.我们同样可以提供与您已经使用过的GIBCO血清相匹配的某一批号血清.使用这一程序,您将无须再做费时费力的批次检验工作,因为我们提供的血清与您的需求相匹配.
保留血清检验程序:对于一些极端敏感的应用,使用我们的保留血清检验程序可帮助您获得一个样品以检测是否适用于您的培养.在您对样品进行检测的同时,我们保留您所指定数量的同一批号产品.通常血清可保留4个星期,如您需更长的保留周期我们亦可安排.
最终产品的质量控制
我们采取以下方法对每一批次的产品选取一定数量的样品进行质量控制分析.
化学检测
渗透压:使用凝固点降低的方法检测渗透压.我们每天使用美国国家标准技术研究所标定的标准溶液对我们的渗透压检测仪器进行校准.
测定pH值:同样每天使用美国国家标准技术研究所标定的标准溶液对pH计进行校准
电泳图谱:鉴定血清的整体性质.样品被加到醋酸纤维素介质中并在缓冲体系内迁移.条带经染色,清洁,干燥后用密度仪进行扫描以检测白蛋白和球蛋白组分的相对浓度.
氧合血红蛋白检测:为证实是否在适当的条件下进行采血和处理,使用修饰的Fleming方法对血红蛋白进行分光光度检测.
血清总蛋白检测:随着动物年龄的增加血清总蛋白含量也相应地增加.使用自动化的Biuret方法进行总蛋白的测定以确证动物年龄.
免疫球蛋白的检测
我们利用高敏感度及高专一性的ELISA方法,来测定胎牛血清的免疫球蛋白G含量.
稳定性检测程序
在不同的时间间隔对产品进行检测,以确定在适当的储存条件下品质保证的最长期限.
微生物检测
使用美国药典最新版推荐的方法进行微生物的检测以确定无细菌和真菌的污染.
所有的血清都使用Barile & Kern的大体积方法检测支原体.收集的样品至少在肉汤中培养3个星期,同时要进行至少4个在琼脂平板上的亚培养.琼脂平板在有氧和厌氧条件下36℃保温,每周进行一次微生物检验.使用Dienes染色的方法进行支原体菌落的检测.对接种的肉汤要定期进行浊度和pH值变动的检测.同时,所有的血清也要使用Hoechst 荧光DNA染色的方法进行不可在肉汤中培养的支原体筛查.
病毒检测
GIBCO血清严格按照美国联邦法规Title9CFR, Part 113.53中关于动物来源产品成分的要求来进行病毒的检测.
虽然我们无法保证所有的血清均无潜在的病毒污染,但我们可以保证所有的血清均经过完整的病毒检测,符合美国细胞培养制品的产品管理要求.血清是由动物身上所采集的生物制品,而这些动物身上或许带有病毒,因此病毒检测便是要侦测血清中是否含有可能影响细胞株的病毒.地方性的病毒如非细胞病理性的BVD病毒可能存在于某批血清中,这批血清就不能培养对此病毒敏感的细胞.
检测内容如下:
检测的病毒
胎牛血清
牛血清
马血清
蓝舌病毒
Y
牛腺病毒
Y
Y
牛细小病毒
Y
Y
BVDV
Y
Y
狂犬病毒
Y
Y
REOVIRUS
Y
Y
Y
BRSF
Y
ALABANE
Y
细胞致病因子
Y
Y
Y
血吸收因子
Y
Y
Y
酶联免疫检定(Coggins)
Y
培养效能检测
对所有的胎牛血清,GIBCO都进行以下培养效能检测.选择胎牛血清的最重要的标准是其支持特殊的细胞生长的能力,因此,除了保证血清通过严格的品质控制,GIBCO 也同时在实验室条件下对血清的三个重要的培养效能进行检测:
集落效率检定;
分析每一批胎牛血清促成单一细胞集落的能力,及促进老鼠骨髓瘤细胞及其衍生的融合瘤细胞的生长能力.实际应用在低密度非贴附性细胞的集落形成,融合瘤发育以及单克隆抗体的制造.
贴附效率检定;
利用一贴附的,已转型的人类细胞株来检测每一批血清促使低密度细胞贴附及分裂的能力.实际应用在低密度或正常密度,转型细胞株及细胞株的繁殖.
二倍体成纤维细胞生长促进检定;
评估每一批血清能维持难培养的贴附细胞长期生长的能力.培养数代WI-38人类二倍体成纤维细胞,计算每一代培养的细胞总数.此项检测所挑选出的胎牛血清批号能维持难以生长的细胞,贴附性细胞,正常的细胞株的生长及存活.
此外,对部分胎牛血清,我们也进行昆虫细胞生长促进检定.
评估每一批Certified等级胎牛血清,及特定批号的Qualified等级的胎牛血清其促进SF9昆虫细胞生长的能力.此项测试为选择适合昆虫细胞生长及BEVS实验的胎牛血清最佳指标.
对Certified胎牛血清,除以上检测外,还进行如下检测:
噬菌体检测;
我们利用适当的大肠杆菌,例如K12,进行噬菌体溶菌斑记数分析.此检测可以了解胎牛血清收集与制造过程的产品质量,噬菌体浓度高表示胎牛血清的原料处理有问题.
生物化学检测(碱性磷酸酶等21项内容);
激素检测(雌二醇等5项内容);
血红蛋白检测
对ES cell-Qualified FBS,要进行特殊检测以确定对胚胎干细胞未分化的细胞形态的维持能力.
对小牛血清和新生牛血清,我们进行其对VERO细胞生长的支持能力的检测;对马血清,我们进行其对Sp2/O-Ag14细胞生长的支持能力的检测;对部分血清,我们也进行细胞毒性的检测.
订货信息:
| Gibco产品名称 | 货号 | 英文名称 | 规格 | 供应商 |
|---|---|---|---|---|
| Gibco One Shot™ 胎牛血清，优级 | 16000-077/16000-085/26140-129 | One Shot™ Fetal Bovine Serum, Certified | 50ml/40*50ml/40*50ml | GIBCO|021-33779006|33779008 |
| Gibco Sf-900 II SFM (1X), liquid | 10902-096 | Sf-900 II SFM (1X), liquid | 500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco Sf-900 Medium (1.3X), liquid | 10967-032 | Sf-900 Medium (1.3X), liquid | 100ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco Sf-900™ III SFM (1X),liquid | 12658-019 | Sf-900™ III SFM (1X), liquid | 500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco羔羊血清 | 16070-096 | Lamb Serum | 500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco供体牛血清 | 16030-074 | Donor Bovine Serum | 500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco供体牛血清，加铁 | 10371-029 | Donor Bovine Serum, with Iron | 500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco鸡血清 | 16110-082 | Chicken Serum | 500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco马血清 | 16050-130/16050-122/16050-114 | Horse Serum | 100ml/500ml/1000ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco马血清，热灭活 | 26050-070/26050-088 | Horse Serum, Heat-Inactivated | 100ml/500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco牛血清 | 16170-086/16170-078/16170-060 | Bovine Serum | 100ml/500ml/1000ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco牛血清，热灭活 | 26170-035/26170-043 | Bovine Serum, Heat-Inactivated | 100ml/500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco山羊血清 | 16210-064/16210-072 | Goat Serum | 100ml/500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，ES细胞，优级，FBS(US) | 16141-061 | Fetal Bovine Serum, ES Cell-Qualified FBS | 100ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，ES细胞为优级的胎牛血清(美国) | 16141-079 | Fetal Bovine Serum, ES Cell-Qualified FBS | 500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，ES细胞优级 | 10439-024 | Fetal Bovine Serum, ES Cell-Qualified | 500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，ES细胞优级(美国农业部批准) | 10439-016 | Fetal Bovine Serum, ES Cell-Qualified (USDA Approved) | 100ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，MSC优级(美国农业部批准) | 12662-029 | Fetal Bovine Serum, MSC-Qualified (USDA Approved) | 500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，MS细胞优级，FBS | 12763-025 | Fetal Bovine Serum, MS Cell Quallified FBS | 500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，超低IgG | 16250-086/16250-078 | Fetal Bovine Serum, Ultra-Low IgG | 100ml/500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，特优级 | 16000-036/16000-044/16000-069 | Fetal Bovine Serum,Certified | 100ml/500ml/1000ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，特优级，热灭活 | 16250-086/16250-078 | Fetal Bovine Serum, Qualified,Heat-Inactivated | 100ml/500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，透析(美国) | 26400-036/26400-044 | Fetal Bovine Serum, Dialyzed(US) | 100ml/500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，优级 | 10099-133/10099-141/10099-158 | Fetal Bovine Serum, Qualified | 100ml/500ml/1000ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，优级 | 10437-010/10437-028/10437-036 | Fetal Bovine Serum, Qualified | 100ml/500ml/1000ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，优级 | 26140-087/26140-079/26140-095 | Fetal Bovine Serum, Qualified | 100ml/500ml/1000ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，优级，热灭活 | 10100-139/10100-147/10100-154 | Fetal Bovine Serum, Qualified,Heat-Inactivated | 100ml/500ml/1000ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，优级，热灭活 | 10438-018/10438-026/10438-034 | Fetal Bovine Serum, Qualified,Heat-Inactivated | 100ml/500ml/1000ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，优级，热灭活 | 16140-063/16140-071/16140-089 | Fetal Bovine Serum, Qualified,Heat-Inactivated | 100ml/500ml/1000ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，优级-MSC | 12662-011 | Fetal Bovine Serum, MSC-Qualified | 100ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco胎牛血清，优级One Shot™ | 10437-077/10437-085 | Fetal Bovine Serum, Qualified One Shot™ | 50ml/40*50ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco兔血清 | 16120-099/16120-107 | Rabbit Serum | 100ml/500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco新生牛血清 | 16010-167/16010-142 | Newborn Calf Serum | 100ml/1000ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco新生牛血清，优级 | 16010-159 | Newborn Bovine Serum,Qualified | 500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco新生小牛血清，热灭活 | 26010-066/26010-074 | Newborn Calf Serum, Heat-Inactivated | 100ml/500ml | GIBCO|拜力生物 |
| Gibco猪血清 | 26250-084 | Porcine Serum | 500ml | GIBCO|拜力生物 |
有关血清的常见问题
血清是细胞培养中最重要的元素之一.因此,我们特别整理了一些实验室里常会遇到的问题,供大家参考:
1. 保存血清最好的方法
我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃.然而,若存放于4℃时,请勿超过一个月.若您一次无法用完一瓶,建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻.
2. 如何解冻血清才不会使产品质量受损
我们建议您将血清从冷冻箱取出后,先置于2～8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融.但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀.
3. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理
血清中沉淀物的出现有许多种原因,但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一.但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量.
若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤.我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜.
4. 为什么要热灭活血清
加热可以灭活补体系统.激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞.在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清.
5. 有必要做热灭活吗
实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的.经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低.而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是"小黑点",常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增.
因此我们建议您,若非必须,您可以不需要做热处理这一步.如此一来,不但节省您宝贵的时间,更确保血清的质量!
6. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀
GIBICO的胎牛血清 没有预老化,储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素,纤维蛋白原,玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊.这应该不会影响血清的质量.推荐在-20℃储存胎牛血清,避免反复冻融.
7. 如何避免沉淀物的产生
我们建议您在使用血清的时候,注意下列的操作:
解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物.
解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生.
请勿将血清置于37℃太久.若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量.
血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤.
若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀.温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多.
8. Qualified和 Certified 胎牛血清 有什么差别
Certified 胎牛血清包括了Qualified胎牛血清执行的所有的标准检验程序,,除了这些标准检测,Certified胎牛血清还有一些附加的检测:
最终内毒素含量的检测
噬菌体检验
生物化学检测
激素的检测
血红蛋白检测
Sf9 细胞生长促进及方法学检测
9. 如何评估ES细胞合格的胎牛血清
使用D3 ES细胞.这是一个对于胎牛血清中生长促进,生长抑制和分化因子非常敏感的细胞系.
相关生长效率分析:
当ES细胞以非常低的密度传入包含10%胎牛血清的生长培养基中,检测启动和支持ES细胞克隆的能力.
细胞毒分析:
当以非常低的密度传入包含30%胎牛血清的生长培养基中,检测ES细胞和feeder细胞的生长能力.
相关形态学和分化分析:
检测胎牛血清支持未分化ES细胞克隆的能力.通过碱性磷酸酶活性评估分化程度.未分化的ES细胞小颜色深红粉红,分化的细胞较大,丰满,颜色较浅.
所有的分析在没有ESGRO的情况下进行,培养基中出现ESGRO会掩盖由胎牛血清所导致的问题.(ESGRO或LIF经常用来保持ES细胞处于未分化状态.)
培养发现大约8批血清中有1批可以用来培养ES细胞.
（ 上海拜力生物公司 ）