细胞培养中双抗的使用方法

一、什么是双抗？

双抗 是一种含有青霉素(10,000 IU)和链霉素(10,000µg/mL)在100倍的工作浓度的混合液。

二、如何配制双抗？

用20mL空针抽16毫升三蒸水(或PBS)，溶160万单位/瓶的青霉素G钠一支，过滤除菌；用10mL空针抽10毫升三蒸水(或PBS)，溶一支100万单位/瓶的硫酸链霉素一支，过滤除菌。分装至EP管中，-20度保存。使用前每100ml培养液加双抗各100ul-150ul即可。

或者购买配制好的双抗，品牌有HyClone，innovative，Gibco等等。


细胞培养液双抗浓度：青霉素G钠，100-1000U/ml；硫酸链霉素，100-1000μg/ml(100万单位=1g)。

三、培养液中需要加入双抗吗？

加不加双抗不是绝对的，视实际情况而定。

如果你实验室条件足够好，如果你操作足够规范，就尽量不要加双抗了。

相反，如果你实验条件不够，操作也没有绝对把握，还是加的好。

最好的方法是做个实验对照，看有没有必要加双抗。

四、如何加双抗？

加在DMEM里，因为如果是直接在换液传代滴加的话，那个双抗的浓度实在不好控制，如果加多了话对细胞毒性太大，如果担心时效，可以Z在培养液配好后分装于100ml的小玻璃瓶中，在每启用一瓶之前加，加了之后应尽快用完。

五、双抗的保存

将双抗配制好，最好滤菌后再分装到EP管中，保存到-20度以下的冰箱。用时取一支，若一支没用完，可以立即保存到-20度继续再用，但反复冻融的次数不宜过多。
 

 （上海拜力生物编辑整理）