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一、维生素b1的测定
VB1又叫硫胺素
1、食品中VB1的存在形式
⑴ 常以游离态存在;
⑵复合脂形式存在(磷蛋白);
⑶ 辅羧酶形式存在
VB1在酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆以及绿色的蔬菜和牛乳、蛋黄中比较丰富,动物组织不如植物含量丰富。
2、VB1的性质
⑴ VB1在中性、碱性下不稳定,易分解;
⑵ VB1在酸性条件下稳定,即使加热酸性也稳定;
⑶ VB1为白色结晶,微溶于C2H5OH,不溶于乙醚或CHCl3,易溶于水。
3、VB1的测定
世界各国都用荧光法测定
⑴ 原理:硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中,被氧化成一种兰色荧光物质,即为硫色素,在紫外光下,硫色素发出荧光。
⑵ 方法
① 萃取
100g样品于干燥烧杯中,加入100ml0.1NH2SO4,打成匀浆,煮沸30分钟,称取一定的样品经高压锅121℃、20分钟高压酸解
② 水解
在酸解的样品中冷却后加入含有10%糖化酶的10ml2.5MNaAC溶液,摇匀,用15%NaOH调PH=4.5,用淀粉酶使淀粉水解,也可用磷酸酶使淀粉水解,于50℃恒温箱中12小时
③ 纯化
采用柱层析提纯
吸附剂采用的是人造浮石。人造浮石用25%KCl溶液分数次洗涤,主要是把VB1吸附上去,吸附上去后,再用热水淋洗,最后用25%KCl-HAC把VB1洗脱下来,这样就得到纯VB1,再根据上面的原理在碱性下分析。
④ 分析
装填柱子(离子交换柱)→ 提纯 → 氧化 → 测定