大鼠葡萄糖依赖性促胰岛素激素EIA试剂盒使用说明-仪表展览网
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大鼠葡萄糖依赖性促胰岛素激素EIA试剂盒使用说明
2012/9/18 9:06:18
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大鼠葡萄糖依赖性促胰岛素激素EIA试剂盒使用说明
 
原理
本实验采用双抗体夹心 ELISA法。用抗大鼠GIP单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 GIP与单抗结合,加入酶标抗体,形成免疫复合物连接在板上,加入酶底物TMB,出现蓝色,加终止液硫酸,颜色变黄,在450nm处测OD值,GIP浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中GIP浓度。
试剂盒组成2-8℃保存)
酶标板(Coated Wells
96
酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate
6ml
标准品(Standards):6
一套
20×浓缩洗涤液(Wash Buffer
50ml
封板纸
一张
底物工作液(TMB Solution
12ml
坐标纸
一张
终止液Stop Solution
12ml
准备试剂与收集血样
1.          收集标本:血清、血浆(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃-70℃)保存,避免反复冻融。
2.          标准品第一次使用时用0.5ml的标本稀释液溶解,放置半小时混匀后使用,用后放在-20oC保存。溶解后浓度分别为1483.21.60.80 ng/ml
3.         洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
检测程序
1.          建立标准曲线:设标准孔6孔,每孔各加入标准品50ul
2.          加样:待测品孔每孔各加入待测样品50ul
3.          每孔加酶标抗体工作液50ul。将反应板置37120分钟。
4.          洗板:同前。
5.          每孔加入底物工作液100ul,置37暗处反应15分钟。
6.          每孔加入100ul终止液混匀。
7.          30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
结果计算与判断
1.          所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2.          以标准品1483.21.60.80ng/ml为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。
3.          根据样品OD值在该曲线图上查出相应GIP含量。
试剂盒性能
             1.   灵敏度最小的GIP 检测浓度小于0.4ng/ml
2.        特异性:可同时检测重组或天然的大鼠GIP不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。
3.        重复性:板内、板见变异系数均小于10%。
注意事项
             1.   以上标准孔及待测样品均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线。
 2.   洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。
             3.   板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥
             4.   本试剂盒宜置4oC冰箱保存。
 5.   本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!
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