大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA试剂盒-仪表展览网
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大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA试剂盒
2012/9/18 9:06:55
浏览:317

上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639  www.westang.com  
大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA试剂盒
 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)
 
原理
本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 GnRH 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 GnRH与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠GnRH,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止液硫酸,在450nm处测OD值,GnRH浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中GnRH浓度。
试剂盒组成2-8℃保存)
酶标板(Coated Wells
96
酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate
12ml
10×标本稀释液(Sample Buffer
12ml
20×浓缩洗涤液(Wash Buffer
50ml
标准品(Standards):80ng/
2
底物工作液(TMB Solution
12ml
第一抗体工作液(Biotinylated Antibody
12ml
终止液Stop Solution
12ml
准备试剂与收集血样
1.          收集标本:血清、血浆(EDTA)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃-70℃)保存,避免反复冻融。血清、血浆、细胞培养上清可能需要稀释,请先做预实验,以确定稀释倍数
2.          标准品液配制:使用前加入1ml蒸馏水混匀,配成80ng/ml的溶液设标准管8管,第一管加标本稀释液900ul,第二至第八管加入标本稀释液500ul。在第一管中加入80ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。
3.          10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。
4.         洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
检测程序
1.          加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37120分钟。
2.          洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。
3.          每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置3760分钟。
4.          洗板:同前。
5.          每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置3730分钟。
6.          洗板:同前。
7.          每孔加入底物工作液100ul,置37暗处反应15分钟。
8.          每孔加入100ul终止液混匀。
9.          30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
结果计算与判断
1.          所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2.          以标准品80004000200010005002501250 pg/ml为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。
3.          根据样品OD值在该曲线图上查出相应GnRH含量,再乘上稀释倍数
试剂盒性能
             1.   灵敏度最小的GnRH 检测浓度小于60pg/ml
2.        特异性:可同时检测重组或天然的大鼠GnRH不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。
3.        重复性:板内、板见变异系数均小于9.7%。
注意事项
             1.   以上标准孔及待测样品均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线。
 2.   洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。
             3.   板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥
             4.   本试剂盒宜置4oC冰箱保存。
 5.   本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!
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