人抗核抗体(ANA)Elisa试剂盒

人抗核抗体(ANA)Elisa试剂盒组成:

1.30倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶

2.酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(160ng/L) 0.5ml×1 瓶

3.酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶

4.样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份

5.显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张

6.显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个

标本要求:

1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤:

1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

80ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液

40ng/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液

20ng/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液

10ng/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液

5ng/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.终止:每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算,以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项:

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期:

1.试剂盒保存:2-8℃。

2.有效期:6个月