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使用目的:
本试剂盒用于饲料、鱼、虾和肉类组织(如鸡、牛肉和猪肉),鸡蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿样中赭曲霉素(Ochratoxin)残留的定量检测。
实验原理
本试剂盒采用直接竞争ELISA方法,在微孔板包被有赭曲霉素(Ochratoxin)偶联抗原,加入赭曲霉素(Ochratoxin)标准品或样品,游 离赭曲霉素(Ochratoxin)与微孔条上预包被的赭曲霉素(Ochratoxin)偶联抗原互相竞争抗赭曲霉素(Ochratoxin)抗体酶标记 物,用TMB底物显色,加入终止液后颜色由蓝色变为黄色,用酶标仪在450nm波长下进行检测,吸光值与样品中赭曲霉素(Ochratoxin)含量成反 比,通过标准曲线计算样品中赭曲霉素(Ochratoxin)的含量。
试剂盒组成
1 预包被的 赭曲霉素 (Ochratoxin)偶联抗原的可拆酶标板:1块(12孔×8条)。
2 赭曲霉素(Ochratoxin)标准品:6瓶(1ml/瓶),含量分别是:0μg/ml,0.01μg/ml,0.02μg/ml,0.04μg/ml,0.08μg/ml,0.16μg/ml
3抗赭曲霉素(Ochratoxin)抗体酶结合物:1瓶(6ml)。
4显色液A:1瓶(6ml)。
5显色液B:1瓶(6ml)。
6终止液:1瓶(6ml),2M硫酸。
7样本稀释液:1瓶(10×, 6ml),用于样品稀释用。
8浓缩洗涤液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。
贮存
1 试剂盒贮存于2~8℃,切勿冷冻
2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
注意事项
1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
2 不要使用过期试剂盒。
3 试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(25±2℃),建议至少回温2小时。
4 标准品中含有黄曲霉素,使用时应特别注意,操作时应带手套。
5 终止液中含有硫酸,使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。
6 不同标准品、样品所用吸头不能混用,否则会影响试验结果。
7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用;不同标准品、样品所用吸头不得混用,否则会影响实验结果。
8 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液,否则会影响实验结果
9 混合试剂时应避免起泡。
样品处理程序(样品在提取过程中,要严格按说明书操作,提取过程中应准确稀释,否则会出现结果不准确,样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存)
1取10g粉碎的样品,加 20ml 70%甲醇溶液
2强力振荡3分钟
3用Whatman No 1滤纸过滤
4取25µl处理后的样品,加入25µl样本稀释液于反应孔中(样本稀释倍数为2)
酶免分析步骤
1 实验须知
2实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温(25±2℃),时间约2小时。回温至室温(25±2℃)后再取出微孔条,多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存
注:一定保证回温充分,否则影响检测的精确度和准确度。
3使用后请立即将试剂放回2~8℃保存
4请不要改变分析程序
5请使用精确的微量移液器
6操作一旦开始,请不要中断任何程序
7ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序,请严格按照要求操作
8为避免交叉污染,每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样
9 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面
10分析步骤
11预先进行编号,标记B0、标准品和样品的位置,推荐进行双孔检测
12取所需数量的微孔(微孔条可拆),将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存
13样品稀释液(10×)、浓缩洗涤液(10×)稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)
14在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml标准品溶液
15在各标准孔中加入50μl的标准品溶液
16在各样品孔中加入50µl样品溶液
17在所有孔中加入50µl的抗黄曲霉素B1抗体酶结合物
18轻轻晃动反应板几秒钟。
1937℃温浴30min (温浴过程中不时轻拍反应板,可以减少双孔误差)
20甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板5次,最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。
21反应
22洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl显色液A,再加 50µl显色液B;轻微晃动反应板使之彻底混匀
23 37℃温浴10min
24 每孔中加入50µl终止液,混匀
25 在450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。
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