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北京慧德易教您怎样选择 色谱柱
现代高效液相 色谱 中,分离效果好坏很大程度上取决于 色谱 填料的选择。但是 色谱 填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解。
1.硅胶基质填料
(1)正相 色谱
由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组份的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
(2)反相 色谱 反相色谱用的填料常是以硅胶为基质表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。
反相 色谱 所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出 色谱 的顺序是极性较强的组份最先被冲洗出,而极性弱的组份会在 色谱 柱上有更强的保留。
常用的反相填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(butyl)、C6H5(Phenyl)等。
2.聚合物填料
聚合物填料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等,其主要优点是在pH值为1~14均可使用。
相对于硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。
3.其它无机填料