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免疫磁珠细胞分选过程中常见的问题
2013/1/10 9:11:13
浏览:12587
细胞分选是细胞生物学、分子生物学最重要的技术方法及必要前提,根据细胞的类型及后续试验目的,目前技术比较成熟且应用较广泛的主要有:密度梯度离心法、免疫密度离心法、免疫磁珠法和流式技术等。随着科技的不断进步,相信各种方法越来越完善,同时一些新的方法也在研究之中,如微芯片CHIP技术。
其中,免疫磁珠技术因具有特异性好、灵敏度高、分选速度快、使用方便、成本低、应用广等特点,自应用推广以来受到广泛而大量的应用,目前已经成为最主要的细胞分选方法。
本文以问答的方式,就免疫磁珠细胞分选过程中常见的问题略做说明,希望能给您带来些帮助!
首先,了解免疫磁珠技术的原理:
1、基于抗体对抗原的特异性识别;
2、磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上,从而与细胞相连进行标记(如下图);
   
3、在高强度、梯度磁场中标记的细胞被磁性吸附,未标记细胞首先流出,然后洗脱被吸附的细胞(阳性分选)达到细胞磁性分离的目的。
     
下面我们了解关于免疫磁珠细胞分选过程中常见的问题
1、都能分选哪些细胞?
答:理论上可以分选所有的细胞,但需要根据所分选细胞的特性开发出相应抗体的磁珠。实际上,目前市场上已经进行能够购买到几乎所有常用的细胞分选磁珠(市场上应用最多的为德国美天旎Miltenyi磁珠,种类最为齐全)。
2、需要哪些设备和试剂耗材?
答:需要的设备有:分选器(提供磁场)、分选架(为分选器提供支撑的支架);所需耗材有:分选柱(细胞分离及洗脱的容器)和磁珠。根据分选方式、分选量以及操作方式德国美天旎Miltenyi提供多种类型分选器(Mini免疫磁珠细胞分选仪、Midi免疫磁珠细胞分选仪、Mini&Midi免疫磁珠细胞分选仪、 Super 免疫磁性细胞分 选仪 Vario 免疫磁性细胞分 选仪以及autoMACSTM Pro全自动免疫磁珠分选仪),其中手动方法分选最常用的的是Mini&MidiMACS分选器,autoMACSTM Pro全自动免疫磁珠分选仪则大量应用于医院等大量分选细胞的单位。
3、分选柱是否可重复使用?
答:分选柱属耗材,不可永久重复使用,可处理后重复使用2-5次。处理方法:将长试管注满PBS,回抽柱子的活塞,倒出回抽液。倒入新的PBS,打出之;重复两次---此时基本上将柱子内的杂细胞除尽。再抽、打两三次无水酒精或95%酒精,然后置于50-60度烘箱,过夜,即能防止生锈。
4、一支分选柱能分选多少细胞?
答:根据柱子种类不同,具体能分选的细胞数目同,基本数量应在1071010间。详细信息请咨询经销商或查看说明书材料。
5、一瓶磁珠能使用多久?或能分选多少细胞?
答:一瓶2ml装大约可以分选109个细胞。
6、分选的细胞纯度是多少?
答:良好的实验条件及正确的操作下,一般的纯度都在90%以上。
7、一次分选所需时间?
答:手动操作在30分钟内可完成分选,自动分选2.5-10分钟即可。
8、分选后的细胞可以进行哪些应用?
答:美天旎MiltenyiMACS技术,不活化细胞,不改变细胞功能,分选细胞活性好,可用于进一步的细胞培养或细胞与分子水平的分析。
9、Veridex公司的Cellsearch 系统的区别是什么?
答:两者作用和应用范围都不相同。美天旎Miltenyi免疫磁珠分选技术主要是对细胞进行分选,使用简单,操作便利,几乎可应用到所有的细胞,且设备与耗材价格更能普及;而Cellsearch 系统主要是应用于外周血循环肿瘤细胞的分析,其CellTracks®AutoPrep®系统本身即是一个全自动免疫细胞分选仪,能很好的富集CTC,
CellTracks®Analyzer II系统是一台光学分析系统属于细胞分析仪器,所以Cellsearch 系统是为临床检查、诊断服务的医疗设备,仪器耗材的价格昂贵,适用CTC的分选试剂(磁珠抗体)种类单一,不能广泛应用于细胞分选实验。
10、   有哪些不足?或不能进行哪些分选?
答:主要有两种细胞不能分选:a、不能根据细胞大小分选细胞;b、不能分选在胞内表达某种蛋白的活细胞(GFP等)。
 
 
 

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