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免疫磁珠细胞分选过程中常见的问题
2013/1/10 9:11:13
浏览：12587
细胞分选是细胞生物学、分子生物学最重要的技术方法及必要前提，根据细胞的类型及后续试验目的，目前技术比较成熟且应用较广泛的主要有：密度梯度离心法、免疫密度离心法、免疫磁珠法和流式技术等。随着科技的不断进步，相信各种方法越来越完善，同时一些新的方法也在研究之中，如微芯片CHIP技术。
其中，免疫磁珠技术因具有特异性好、灵敏度高、分选速度快、使用方便、成本低、应用广等特点，自应用推广以来受到广泛而大量的应用，目前已经成为最主要的细胞分选方法。
本文以问答的方式，就免疫磁珠细胞分选过程中常见的问题略做说明，希望能给您带来些帮助！
首先，了解免疫磁珠技术的原理：
1、基于抗体对抗原的特异性识别；
2、磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连进行标记（如下图）；
3、在高强度、梯度磁场中标记的细胞被磁性吸附，未标记细胞首先流出，然后洗脱被吸附的细胞（阳性分选）达到细胞磁性分离的目的。
下面我们了解关于免疫磁珠细胞分选过程中常见的问题：
1、都能分选哪些细胞？
答：理论上可以分选所有的细胞，但需要根据所分选细胞的特性开发出相应抗体的磁珠。实际上，目前市场上已经进行能够购买到几乎所有常用的细胞分选磁珠（市场上应用最多的为德国美天旎Miltenyi磁珠，种类最为齐全）。
2、需要哪些设备和试剂耗材？
答：需要的设备有：分选器（提供磁场）、分选架（为分选器提供支撑的支架）；所需耗材有：分选柱（细胞分离及洗脱的容器）和磁珠。根据分选方式、分选量以及操作方式德国美天旎Miltenyi提供多种类型分选器（Mini免疫磁珠细胞分选仪、Midi免疫磁珠细胞分选仪、Mini&Midi免疫磁珠细胞分选仪、 Super 免疫磁性细胞分 选仪 、 Vario 免疫磁性细胞分 选仪以及autoMACSTM Pro全自动免疫磁珠分选仪），其中手动方法分选最常用的的是Mini&MidiMACS分选器，autoMACSTM Pro全自动免疫磁珠分选仪则大量应用于医院等大量分选细胞的单位。
3、分选柱是否可重复使用？
答：分选柱属耗材，不可永久重复使用，可处理后重复使用2-5次。处理方法：将长试管注满PBS，回抽柱子的活塞，倒出回抽液。倒入新的PBS，打出之；重复两次---此时基本上将柱子内的杂细胞除尽。再抽、打两三次无水酒精或95%酒精，然后置于50-60度烘箱，过夜，即能防止生锈。
4、一支分选柱能分选多少细胞？
答：根据柱子种类不同，具体能分选的细胞数目同，基本数量应在107～1010间。详细信息请咨询经销商或查看说明书材料。
5、一瓶磁珠能使用多久？或能分选多少细胞？
答：一瓶2ml装大约可以分选109个细胞。
6、分选的细胞纯度是多少？
答：良好的实验条件及正确的操作下，一般的纯度都在90%以上。
7、一次分选所需时间？
答：手动操作在30分钟内可完成分选，自动分选2.5-10分钟即可。
8、分选后的细胞可以进行哪些应用？
答：美天旎MiltenyiMACS技术，不活化细胞，不改变细胞功能，分选细胞活性好，可用于进一步的细胞培养或细胞与分子水平的分析。
9、与Veridex公司的Cellsearch 系统的区别是什么？
答：两者作用和应用范围都不相同。美天旎Miltenyi免疫磁珠分选技术主要是对细胞进行分选，使用简单，操作便利，几乎可应用到所有的细胞，且设备与耗材价格更能普及；而Cellsearch 系统主要是应用于外周血循环肿瘤细胞的分析，其CellTracks®AutoPrep®系统本身即是一个全自动免疫细胞分选仪，能很好的富集CTC，
而CellTracks®Analyzer II系统是一台光学分析系统属于细胞分析仪器，所以Cellsearch 系统是为临床检查、诊断服务的医疗设备，仪器耗材的价格昂贵，适用CTC的分选试剂（磁珠抗体）种类单一，不能广泛应用于细胞分选实验。
10、 有哪些不足？或不能进行哪些分选？
答：主要有两种细胞不能分选：a、不能根据细胞大小分选细胞；b、不能分选在胞内表达某种蛋白的活细胞（GFP等）。